东亚钳蝎抗神经兴奋肽Ⅱ的表达条件优化及纯化条件研究

摘要

蝎毒中含有许多具有独特生物学活性的成分，东亚钳蝎抗神经兴奋肽Ⅱ是其中一种。将质粒pNJUTRXA-ANEPⅡ转化大肠杆菌BL21(DE3)，通过II)TG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)诱导可溶性的表达出目标蛋白ANEPⅡ。为了提高东亚钳蝎抗神经兴奋肽肽在大肠杆菌中的表达量，通过正交设计实验研究了重组菌的发酵条件，包括接种量、培养时间、诱导时问、诱导剂IPTG使用浓度等对表达的影响。并用SDS聚丙稀酰胺凝胶电泳进行定性分析。 根据目标蛋白含有的组氨酸标记可以和金属离子特异性结合的原理，采用不同的镍离子螯合层析的方案，将目标蛋白初步纯化。同时进行比较，选出最佳的镍柱纯化条件。 本文同时还进行了重组质粒pNJUTRXA-ANEPⅡ的稳定性研究。构建的重组质粒载体pNJUTRXA-ANEPⅡ转化大肠杆菌BL21(DE3)，涂布于LB-AP平板，挑取单菌落，在不同的转接次数测其质粒的突变率为0.002％、0.012％、0.016％；质粒的丢失率为12％、46％、73％。

目录

第一部分前言

第二部分ANEPII表达条件优化

第三部分ANEPII表达蛋白的纯化

第四部分重组质粒在大肠杆菌中稳定性的研究

参考文献

致谢