酚类化合物3，4，5-三羟基-N-对酪醇基苯酰胺的抗癌活性和抗氧化活性的研究

摘要

3,4,5-三羟基-N-对酪醇基苯酰胺(THTEB)是酪醇的一个衍生物，其结构是通过酰胺键连接没食子酸与酪醇两个基团。在本文的研究中，THTEB表现出强烈的抗人宫颈癌HeLa细胞增殖的活性。细胞周期分子显示THTEB可阻滞HeLa细胞周期停留在S期，并伴随着细胞G0/G1以及G2/M期活性的降低。[3H]胸腺嘧啶掺入法实验结果显示，THTEB可抑制DNA复制，这表明DNA合成的阻滞可能是。THTEB阻滞细胞增殖的直接原因。然而，THTEB对RPA的ssDNA结合活性和拓扑异构酶I介导的DNA松弛活性没有影响，这说明RPA和拓扑异构酶I不是THTEB对DNA复制抑制的靶点。此外，通过碱性单细胞凝胶电泳(彗星实验)，我们发现了。THTEB可导致的严重DNA损伤。 在肿瘤发生的所有诱因中，活性氧对DNA以及其它分子量分子的的损伤被认为是疾病发生发展的主要因素。在开发抗肿瘤药物的过程中，通常也检测目标化合物的抗氧化活性以研究这两种活性的内在联系。我们通过1，1-二苯基苦基苯肼(DPPH)，Trolox当量抗氧化能力(TEAC)，清除超氧自由基能力测定，脂质过氧化法以及羟基自由基诱导DNA损伤的方法评价了THTEB的抗氧化活性。上述五种方法检测结果均显示，THTEB具有很强的清除自由基的活性。其中，THTEB对稳定自由基DPPH以及超氧自由基的清除活性超过抗坏血酸的相应活性，其IC50值分别为22.8μM，2.5μM。用TEAC方法测定THTEB总的抗氧化能力大约为0.6，也比维生素C相应值高。脂质过氧化法测定的。THTEB活性要弱于著名的抗氧化化合物2，6-二叔基对甲苯酚(BHT)。此外，非常小浓度比如4μM的THTEB也对羟基自由基导致的pBR322 DNA链断裂具有显著的保护作用。 总之，THTEB作为一种自由基清除剂具有很强的抗氧化活性，可以诱导细胞周期阻滞在S期，同时伴随着DNA．损伤和DNA复制抑制。但是THTEB的作用靶点仍然不明。我们认为THTEB作为一种新的抗肿瘤治疗药物是有价值的。

目录

论文说明：英文缩略词表

声明

摘要

第一章前言

第二章理论部分

2.1关于化合物的抗癌活性

2.1.1抗癌作用的机理

2.1.2抗癌药物的设计

2.1.3流式细胞技术检测肿瘤细胞周期的机理

2.1.4单细胞凝胶电泳法测定化合物导致细胞DNA损伤机理

2.2关于化合物的抗氧化活性

2.2.1抗氧化作用的机理

2.2.2抗氧化剂的设计

2.2.3清除有机自由基DPPH法测化合物抗氧化能力的作用机理

2.2.4 Trolox当量的抗氧化能力(TEAC)实验的机理

2.2.5测定化合物清除超氧自由基能力的实验机理

2.2.6测羟基自由基诱发的单细胞DNA损伤的保护作用的实验机理

2.2.7脂质过氧化反应的实验机理

第三章实验部分

3.1仪器和试剂

3.1.1实验试剂

3.1.2实验设备与仪器

3.2 THTEB的制备

3.3 THTEB的抗癌活性检测

3.3.1细胞系

3.3.2细胞毒实验和细胞增殖实验

3.3.3流式细胞技术检测THTEB对HeLa细胞的细周期的影响

3.3.4[3H]胸腺嘧啶掺入法测定THTEB对DNA复制的影响

3.3.5单细胞凝胶电泳法测定THTEB对细胞DNA的影响

3.3.6 THTEB对单链结合蛋白RPA与DNA结合能力的影响

3.3.7 THTEB对Topo Ⅰ诱导的DNA解旋能力的影响

3.4 THTEB抗氧化活性的检测

3.4.1用清除有机自由基DPPH法评价THTEB的抗氧化能力

3.4.2测量THTEB的Trolox当量的抗氧化能力(TEAC)

3.4.3用清除超氧自由基法评价THTEB的抗氧化能力

3.4.4 THTEB对羟基自由基诱发的单细胞DNA损伤保护作用的研究

3.4.5THTEB对脂质过氧化作用的影响

第四章结果和讨论

4.1 THTEB结构确证

4.2 THTEB的抗癌活性检测

4.2.1 THTEB对HeLa细胞成活和增殖的影响

4.2.2 THTEB对HeLa细胞周期的影响

4.2.3 THTEB对HeLa细胞的DNA复制的影响

4.2.4 THTEB对HeLa细胞的DNA损伤的影响

4.2.5 THTEB对Topo Ⅰ介导的DNA解旋活性的影响

4.2.6 THTEB对RPA的ssDNA结合活性的影响

4.3 THTEB的抗氧化活性检测

4.3.1 DPPH法测定THTEB的抗氧化能力

4.3.2 TEAC实验测量的THTEB的抗氧化能力

4.3.3测定THTEB对超氧自由基的清除能力

4.3.4 THTEB对由羟自由基诱发的单细胞DNA损伤的影响

4.3.5使用鼠肝匀浆测定THTEB在脂质过氧化中的作用

第五章结论和展望

参考文献

致谢