H5亚型禽流感病毒的生物学特性及其基因重组疫苗株的构建

摘要

“97香港禽流感事件”及近年来世界范围内频繁暴发禽流感疫情并再次导致数十人感染致死充分证明，H5亚型高致病性禽流感对人类公共卫生构成了巨大的潜在威胁。 本论文对我国2003年分离的1株H5N1亚型禽流感病毒A/Duck/Guangxi/27/03的生物学特性进行了研究。首先，我们对其进行了全基因组的序列测定，并与1996-2006年的东亚地区H5N1亚型HPAI代表株基因组序列进行了比较，分子遗传衍化的分析结果表明：此毒株的HA、NA、NP和M基因与A/Goose/Guangdong/1/96高度同源，且HA基因裂解位点表现为连续的多个碱性氨基酸这一高致病性特征；而其PB2、PB1、PA、NS基因与A/Goose/Guangdong/1/96的亲缘关系相对较远。 其次，通过此毒株对鸡的致病性试验发现：本毒株EID<,50>为10<'-8.38>/ml，感染鸡的静脉接种指数IVPI为3.00、鸡静脉接种的平均死亡时间MDT为1天，故可判断此毒株为高致病性禽流感病毒。为进一步了解此毒株是否具有感染哺乳动物的能力，我们将上述病毒经鼻腔感染哺乳动物模型BALB/c小鼠，研究结果显示，本病毒MLD<,50>为10<'0.63>EID<,50>，对小鼠也呈现了高致病力，而从其感染小鼠的组织嗜性试验结果来看，病毒经鼻腔接种感染小鼠后，其在肺脏中一直保持较高的含量；在脾中病毒的含量次之，而且在肺和脾中病毒含量随时间的增加有所下降；在脑和肾脏也可分离到病毒但含量不高。综合以上结果表明，此株对禽类表现为高致病性的H5N1亚型禽流感病毒具有感染并致死哺乳动物模型BALB/c小鼠的能力。 H5N1亚型高致病性禽流感的爆发给世界养禽业造成了毁灭性的打击，而疫苗免疫是防止其发生的重要手段。本研究利用反向遗传操作技术人工救获了H5N2亚型重组流感病毒疫苗株，两个表面抗原基因HA和NA来源于A/Tuekey/England/N28/73，而其内部基因来源于高滴度鸡胚适应株A/Puerto Rico/8/34。本疫苗株的成功构建为进一步防控我国禽流感的发生奠定了理论和实验依据。

目录

文摘

英文文摘

声明

1引言

1.1禽流感的概述

1.1.1禽流感的病原及其特性

1.1.2禽流感病毒的分子生物学特性

1.1.3禽流感流行的历史和现状

1.2禽流感疫苗

1.2.1灭活全病毒疫苗

1.2.2亚单位疫苗

1.2.3重组活载体疫苗

1.2.4 DNA疫苗

1.2.5标记疫苗

1.3 A型流感病毒的反向遗传学技术

1.3.1流感病毒反向遗传学技术的发展过程

1.3.2流感病毒反向遗传学技术的应用

1.4本研究的目的和意义

2试验部分

2.1试验一A/Duck/Guangxi/27/03（H5N1）禽流感病毒的分子遗传与衍化分析

2.1.1材料与方法

2.1.2结果

2.1.3讨论

2.2试验二A/Duck/Guangxi/27/03禽流感病毒对BALB/c小鼠的致病性试验

2.2.1材料与方法

2.2.2结果

2.2.3讨论

2.3试验三H5N2亚型禽流感病毒基因重组疫苗株的构建

2.3.1材料与方法

2.3.2结果

2.3.3讨论

3结论

致谢

参考文献

附录

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