羊传染性脓疱病毒F1L基因重组山羊痘病毒的构建及生物学特性研究

摘要

研究选择GPV作为病毒载体，构建可高效表达F1L蛋白的重组山羊痘病毒，并对其生物学特性进行初步研究。首先将F1L基因与转移载体pUC-TK12-LacZ连接;转染己接种山羊痘病毒的BHK-21细胞，通过蓝白斑筛选、纯化，对重组病毒进行连续传代培养，应用PCR、间接免疫荧光和Western免疫印迹等方法进行鉴定，并对重组病毒进行不同温度、酸碱度、有机溶剂和紫外照射等处理，进行TCID50评价;rGPV-F1L免疫小鼠后，经酶联免疫吸附实验检测其特异性抗体水平。结果显示成功构建重组病毒转移载体pTL-F1L，将其转染BHK-21细胞后，通过蚀斑纯化获得了可稳定遗传的重组病毒rGPV-F1L。间接免疫荧光和Western免疫印迹检测发现其可稳定表达F1L蛋白。55℃30min或紫外照射1h即可灭活重组病毒，且其对强酸、强碱、有机溶剂等较敏感。接种重组山羊痘病毒的小鼠40d内机体可持续产生高水平的特异性抗体。以上结果表明获得了可稳定表达羊传染性脓疱病毒F1L的重组山羊痘病毒疫苗候选株，其具有良好的抗原性和生物学活性，这为同时预防羊传染性脓疱病和羊痘提供新途径。