羊乳腺中IGF-1与其受体基因表达量的相关性研究

摘要

本研究以不同时期的山羊的乳腺组织为原料，分别采用平衡饱和竞争放射免疫分析法(RIA)和基因扩增的方法检测不同时期羊乳腺组织中类胰岛素生长因子(IGF-1)的含量和表达量，RIA结果表明：在妊娠期时，羊乳腺组织中的IGF-1含量开始增加，且明显高于对照组(532.21±5.73ng/mL)；在分娩期前后，IGF-1含量达到最大(4641.72±80.84 ng/mL)；进入泌乳期后，乳腺组织中的IGF-1含量逐渐减少。RT-PCR结果表明：羊乳腺组织中的IGF-1的表达量随妊娠天数的增加而增加，当分娩后，乳腺中的IGF-1的表达量逐渐下降。将两种检测结果进行比较分析，IGF-1的含量和表达量均在羊的分娩期达到最高值。 用SPASS分析软件对数据IGF-1β-actin和IGF-1R/β-actin的比值作相关性分析，结果表明：在羊的非干乳期内，其乳腺内IGF-1的表达量(X)和IGF-1R的表达量(Y)呈正相关。其受体的表达量符合模型Y=-0.0057+2.0526X-0.7930X<'2>+0.1074X<'3>。 本研究最终探明了各时期乳腺组织中IGF-1的表达模式及与其受体的协同表达关系，这将为进一步研究和开发功能性IGF-1相关产品奠定理论基础。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩略词表

声明

1引言

1.1类胰岛素生长因子-1（IGF-1）

1.1.1 IGF-1概述

1.1.2 IGF-1基因结构

1.1.3 IGF-1基因表达及调控

1.2类胰岛素生长因子-Ⅰ受体（IGF-1R）

1.3 IGF-1的生物活性

1.4 IGF-1的生物学功能

1.4.1 IGF-1与骨骼

1.4.2 IGF-1与神经系统

1.4.3 IGF-1与肿瘤

1.5 IGF-1的提取方法

1.6.IGF-1含量的检测—放射免疫分析法（radiommunoas-say,RIA）

1.6.1放射免疫分析的原理

1.6.2放射免疫分析（RIA）的优点

1.6.3放射免疫分析的缺点

1.7基因表达量的研究方法

1.7.1 NORTHERN印迹法

1.7.2 RT-PCR法

1.7.3微阵列法技术

1.7.4基因表达连续分析法（SAGE）

1.7.5微球法

1.8本研究的目的和意义

2材料与方法

2.1实验材料

2.1.1主要仪器和设备

2.1.2主要试剂

2.1.3主要试剂配制

2.1.4实验器具的处理与准备

2.2实验方法

2.2.1从山羊的乳腺中提取IGF-1及IGF-1含量的测定

2.2.2 IGF-1R的表达量测定

2.2.3 IGF-1和IGF-1R的检测

2.2.4 RIA和PCR两种方法测定IGF-1的相关性

3结果

3.1不同泌乳时期山羊的乳腺中IGF-1含量测定

3.2 IGF-1R的表达量测定

3.2.1乳腺组织中总RNA的完整性

3.2.2不同退火温度的扩增

3.2.3不同引物比例的同管扩增

3.2.4不同循环次数的同管扩增

3.3不同时期IGF-1和IGF-1R的表达量分析

3.3.1不同时期IGF-1和IGF-1R的检测

3.3.2不同时期IGF-1和IGF-1R的相关性

3.3.3建立不同时期IGF-1和IGF-1R的数学模型

3.4不同方法提取IGF-1的相关性

4结论

致谢

参考文献

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