牛骨形态发生蛋白受体IB基因（BMPR-IB）cDNA的克隆及序列分析

摘要

本研究从影响牛的繁殖性能的BMPR-IB基因出发，利用Genbank中其它物种的序列信息，通过序列比对、分析和RT-PCR方法，对尚未报道的牛BMPR-IB基因序列进行扩增、克隆测序、及序列分析。 方法：1、在Gerabank中查找人、小鼠和羊的BMPR-IB基因序列，运用DNAStar软件对这些序列进行同源性分析。依据同源性较高区域设计引物。首先提取牛卵巢组织中的总RNA，采用RT-PCR技术扩增牛BMPR-IB的部分eDNA序列，将此片段重组到PMD18-T载体中，双酶切和PCR鉴定后测序，获得长为953bp的牛BMPR-IB部分cDNA序列，克隆片段编码297个氨基酸。2、克隆后序列与Genbank公布其它物种包括绵羊、山羊、人、猴子、黑猩猩、家鼠、挪威鼠、猪、袋鼠、狗和鸡的核苷酸序列同源比对，发现它们的同源性分别为98％、97.6％、91.9％、91.7％、92.1％、87.9％、87.3％、92.9％、86.8％、91.6％、83.9％，证实克隆的序列为牛BMPR-IB序列，为克隆其它BMP家族成员提供了依据。3、进行了氨基酸序列基本性质进行了分析，并发现牛的氨基酸序列与上述11种动物的氨基酸同源性都在98％以上，并且进一步对蛋白质二级结构进行了预测，为我们更好的理解牛的生殖机理提供帮助。此序列已登陆Genbank，登陆号：D0489533。

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论文说明：符号说明

声明

1引言

1.1骨形成蛋白(BMP)的研究进展

1.1.1 BMP发现简史

1.1.2 BMP的结构

1.1.3 BMP基因的克隆

1.1.4 BMP的染色体定位

1.1.5 BMP的生物学功能

1.2 BMP受体的研究进展

1.2.1 BMP受体分类

1.2.2 BMP受体在卵巢的表达

1.2.3 BMP受体信号传导机制

1.3 BMPR-IB基因的研究进展

1.3.1 BMPR-IB基因的发现

1.3.2 BMPR-IB的三维结构模型

1.3.3 BMPR-IB基因在繁殖中的作用

1.4本实验的目标和意义

2实验材料与方法

2.1实验材料

2.1.1菌株和克隆载体

2.1.2主要仪器设备

2.1.3主要药品及试剂

2.1.4缓冲液及主要试剂的配制

2.2实验方法

2.2.1样本的采集

2.2.2 RNA酶的灭活

2.2.3总RNA的提取

2.2.4电泳检测提取总RNA

2.2.5引物的设计与合成

2.2.6反转录(RT)

2.2.7 PCR的反应

2.2.8琼脂糖凝胶电泳鉴定扩增产物

2.2.9牛BMPR-IB基因cDNA的克隆及重组质粒的筛选和鉴定

2.2.10 DNA序列测定分析

3结果分析

3.1总RNA提取结果与分析

3.2RT-PCR扩增产物琼脂糖凝胶电泳检测结果

3.3目的片断的回收

3.4菌液PCR鉴定

3.5重组质粒酶切的鉴定

3.6测序结果

3.7牛BMPR-IB基因cDNA序列分析

3.7.1牛BMPR-IB基因的分子质量、碱基组成、碱基分布

3.7.2牛BMPR-IB的cDNA序列与其它动物BMPR-IB cDNA的比较

3.7.3不同种生物BMPR-IB基因核苷酸序列的同源性分析与进化分析

3.8牛BMPR-IB蛋白质序列的基本分析

3.8.1牛BMPR-IB基因分子质量、氨基酸组成、半胱氨酸的间隔分析

3.8.2牛BMPR-IB蛋白疏水性和跨膜区分析

3.9牛BMPR-IB蛋白质二级结构的预测

3.10不同种生物蛋白质序列同源性分析与进化分析

4讨论

4.1 BMPR-IB cDNA核苷酸序列及同源性比较

4.2牛BMPR-IB蛋白质序列的基本性质分析

4.2.1牛BMPR-IB蛋白基因分子质量和氨基酸组成分析

4.2.2牛BMPR-IB蛋白半胱氨酸距离的分析

4.2.3牛BMPR-IB蛋白疏水性分析

4.2.4牛BMPR-IB蛋白横跨膜分析

4.3牛BMPR-IB蛋白质二级结构的预测

4.4牛BMPR-IB蛋白的同源性分析

5结论

致谢

参考文献

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