呼和浩特地区粘细菌的分离鉴定及抗马铃薯晚疫病菌活性物质的分析

摘要

微生物农药是生物农药的重要组成部分，而且在最近几年取得了巨大的发展。粘细菌是一个产生丰富次生代谢产物的巨大资源库，分离鉴定粘细菌不仅可以丰富粘细菌资源库，而且可以就为新药的研发提供材料保证。
　　本研究采用兔粪诱导、滤纸诱导、大肠杆菌诱导等三种方法从内蒙古呼和浩特地区采集的样品中分离得到73株粘细菌，经纯化得到33株纯菌，通过对菌株子实体和菌落形态学的初步观察、生理生化特征和16S rDNA分子鉴定，33株菌分别属于珊瑚球菌属、原囊菌属、粘球菌属、孢囊杆菌属、堆囊菌属。通过抗菌活性检测，17株粘细菌有抗大肠杆菌的活性，18株具有抗金黄色葡萄球菌活性，17株则有抗酿酒酵母菌活性，22株表现出抗枯草芽孢杆菌性质，27株粘细菌表现出不同程度的抗马铃薯晚疫病菌活性，其中6株对抗马铃薯晚疫病菌有较高的抑菌性。
　　对抗马铃薯晚疫病菌活性较高的菌株Xt-2的抗马铃薯晚疫病活性物质进行了初步分析。发现活性物质主要存在于菌株的胞外代谢产物中。活性物质不是蛋白质，对紫外的耐受性比较好，但对高温、过酸或过碱的环境比较敏感。对菌株进行液体培养后，通过硅胶柱层析、葡聚糖凝胶层析、气质联用仪、液质联用仪等方法对活性物质进行了分离鉴定。结果在分离的活性组分中鉴定到了10种主要的物质。液质联用仪检测到4种主要的物质，式量分别是246.1，264.1，282.1和563.3。气质联用仪的结果经过专门的NIST11数据库比对，可以得知式量分别为126.1，126.1，155.1，236.1，220.2，306.1。分子式分别为:C8H14O，C8H14O，C8H13NO2，C14H20O3，C15H24O，C17H22O5。
　　本研究对丰富内蒙古地区粘细菌资源具有一定贡献，为该地区粘细菌的深入研究及抗马铃薯晚疫病新药研发奠定了一定的基础。

目录

声明

摘要

1 引言

1．1 粘细菌概述

1．2 粘细菌的次级代谢产物

1．3 粘细菌的国内外研究现状与历程

1．4 马铃薯晚疫病的概述

1．5 本研究的目的和意义

2 材料与方法

2．1 材料

2．1．1 实验菌株及样品

2．1．2 实验主要的设备

2．1．3 实验主要培养基

2．1．4 实验所用序列分析软件

2．2 实验方法

2．2．1 粘细菌的分离纯化

2．2．2 形态特征的鉴定

2．2．3 生理生化特征的鉴定

2．2．4 16S rDNA的分子鉴定’

2．2．5 粘细菌的抗菌活性检测

2．2．6 菌株的抗致病疫霉活性物质分析

3 结果与分析

3．1 菌株的形态特征观察

3．2 菌株的生理生化特征检测

3．3 菌株的16S rDNA分子鉴定

3．3．1 菌株基因组DNA的提取

3．3．2 16S rDNA的PCR扩增

3．3．3 菌落的PCR鉴定

3．3．4 序列测定与分析

3．4 粘细菌的抗菌活性分析

3．5 菌株Xt-2的抗致病疫霉活性分析

3．5．1 菌株的抗致病疫霉活性

3．5．2 菌株Xt-2代谢产物的抗菌活性测定

3．5．3 菌株Xt-2胞外代谢产物的稳定性

3．5．4 发酵时间对菌株代谢产物的影响

3．5．5 活性物质萃取条件的摸索

3．5．6 活性物质的硅胶柱色谱法(柱层析)分离

3．5．7 活性物质的葡聚糖凝胶Sephadex LH-20柱分离

3．5．8 活性物质的液相、气相色谱质谱联用仪检测

4 讨论与结论

4．1 讨论

4．1．1 粘细菌的抗菌活性

4．1．2 粘细菌不同诱导方法的比较

4．1．3 盐度对粘细菌的分离纯化的影响

4．1．4 粉碎度对粘细菌纯化的影响

4．2 结论

致谢

参考文献

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