鉴别诊断山羊痘、绵羊痘、羊口疮和小反刍兽疫多重PCR检测方法的建立

摘要

山羊痘病毒、绵羊痘病毒、羊口疮病毒和小反刍兽疫病毒均可单一感染山羊和绵羊，或多重感染。为快速检测并鉴别四种病毒引起的疾病，建立多重PCR检测方法，并对建立方法进行了实验条件的优化和筛选。
　　本研究根据GenBank数据库收录的山羊痘病毒、绵羊痘病毒、羊口疮病毒和小反刍兽疫病毒的基因序列，用Primer Primer5.0设计四对引物用于扩增四种病毒，其中山羊痘病毒扩增产物长度152bp，绵羊痘病毒扩增产物长度246bp，羊口疮病毒扩增产物长度355bp，小反刍兽疫病毒扩增产物长度538bp，优化后的最佳试验条件为：变性温度94℃，退火温度53℃，循环次数为35次。所建立PCR方法对牛病毒性腹泻-黏膜病病毒、猪瘟病毒和牛传染性鼻气管炎病毒进行扩增均呈阴性，说明该试验有较好的特异性；该PCR反应体系可检测出山羊痘病毒、绵羊痘病毒、羊口疮病毒和小反刍兽疫病毒的最小量分别是0.05ng、8.36ng、0.8ng、1.3ng。结果表明本试验具有快速、特异性强的特点，可用于临床鉴别诊断山羊痘、绵羊痘、羊口疮和小反刍兽疫。

目录

缩 略 语 表

1 引言

1.1 山羊痘和绵羊痘

1.1.1 概述

1.1.2 病原学

1.1.3 流行病学

1.1.4 临诊症状及病理变化

1.1.5 诊断

1.1.6 疫苗及免疫研究

1.2 羊口疮

1.2.1 概述

1.2.2 病原学

1.2.3 流行病学

1.2.4 临诊症状

1.2.5 病理变化

1.2.6 诊断

1.2.7 疫苗研究

1.3.1 概述

1.3.2 病原学

1.3.3 流行病学

1.3.4 临床症状

1.3.5 病理变化

1.3.6 实验室诊断技术

1.3.7 疫苗研究

1.4 本论文的目的与意义

2.1.1 主要病毒

2.1.2 主要仪器

2.1.3 核酸提取所用试剂

2.2.1 引物的设计与合成

2.2.2 核酸的提取

2.2.3 常规PCR反应体系的建立

2.2.4 多重PCR反应体系的建立

2.2.5 多重PCR特异性试验

2.2.6 多重PCR敏感性试验

2.2.7 多重PCR用于临床检测

3.1 常规PCR扩增结果

3.2 PCR反应退火温度筛选结果

3.3 多重PCR扩增结果

3.4 多重PCR特异性试验

3.5 多重PCR敏感性试验

3.6 多重PCR检测临床样品

4 讨论

5.结论

致谢

参考文献

作 者 简 介