JSRV-Env重组质粒对小鼠三种体外细胞的几种细胞生长因子表达影响的研究

摘要

绵羊肺腺瘤病（Ovine pulmonary adenomatosis，OPA或Sheep pulmonary adenomatosis，SPA）的病原—绵羊肺腺瘤病毒（JSRV），目前尚未完全对OPA的复杂发病机制研究清晰，而且关于肿瘤相关细胞因子与OPA发病关联性的研究资料报道较少。研究发现，VEGF、EGFR、TGF-α及EGF四者均与肿瘤新生血管生成、细胞增殖等多个环节密切相关。本研究拟通过检测四者在 JSRV-Env重组质粒（pEGFP-C1-env）转染靶细胞后的表达情况，揭示它们与 OPA肿瘤发生间的关联性，并对OPA针对上述细胞因子进行基因靶向治疗提供一定的理论依据。
　　本研究选用脂质体法将质粒（pEGFP-C1-env）分别瞬时转染TC-1、TC-1-Hyal2及NIH3T3细胞；再利用RT-PCR和Western blot两种方法检测Env蛋白在3种细胞中的表达，同时使用激光共聚焦显微镜观察Env蛋白在3种细胞内的定位。最后，采用荧光定量PCR方法和ELISA方法分别检测转染后3种细胞中VEGF、EGFR、TGF-α及EGF因子的mRNA及蛋白水平的表达。研究结论如下：
　　（1）采用脂质体法成功将质粒pEGFP-C1-env瞬时转染3种细胞，且分别从基因及蛋白水平对Env的表达进行了验证。
　　（2）VEGF、EGFR及TGF-α mRNA及蛋白的表达量均升高，提示JSRV-Env能上调上述细胞因子的表达。
　　（3）NIH3T3细胞中VEGF、EGFR同时显示过表达，提示二者在JSRV-Env转染后的体外细胞或OPA肿瘤中存在正相关性；以及在肿瘤发生过程中二者可共同发挥一定的促进作用。
　　（4）EGFR在2种小鼠源TC-1、TC-1-Hyal2细胞中的表达情况提示存在低表达现象，EGF因子在同样2细胞中的表达情况提示存在不表达现象。
　　综上所述，JSRV-Env能上调细胞因子VEGF、EGFR及TGF-α表达，这提示它们与OPA疾病发生存在一定关联性。本研究为进一步明确肿瘤相关细胞因子与OPA发生的相关性及OPA发生的分子机制提供了重要的信息，同时也为OPA及人细支气管肺泡癌疾病的基因靶向治疗方案提供重要的理论依据。

目录

声明

缩 略 语 表

1 引言

1.1绵羊肺腺瘤概述

1.2 JSRV概述

1.3 JSRV受体透明质酸酶2

1.4 OPA的小型动物模型

1.5 细胞因子VEGF、EGFR、EGF及TGF-a与肿瘤

1.6 外源基因转染真核细胞技术

1.7 研究的目的和意义

2试验一脂质体法转染TC-1、TC-1-Hyal2及NIH 3T3细胞

2.1 材料

2.2 方法

2.3 结果

2.4 讨论

2.5 小结

3 试验二 JSRV-Env对细胞因子VEGF、EGFR、TGF-α及EGF表达的影响

3.1 材料

3.2 方法

3.3 结果

3.4 讨论

3.5 小结

4 全文结论

致谢

参考文献

作 者 简 介