在A549细胞中重组表达具有EGFP标签的抑癌因子LKB1及对细胞生长和p53蛋白水平的影响

摘要

目的：LKB1是关键抑癌因子，其编码基因的缺陷可导致LKB1蛋白的表达或者活性缺失，这与错构瘤性息肉的发生及多种器官癌变密切相关。重建LKB1的表达则可对肿瘤细胞产生生长抑制效应。探讨LKB1在细胞中的定位对研究其功能有重要作用。因此，本研究在人肺腺癌细胞A549中表达具有EGFP荧光标签的重组LKB1，并探讨重建LKB1表达对于A549细胞的生长抑制效应。
　　 方法：应用PCR方法扩增LKB1蛋白编码基因全长cDNA序列，并利用脂质体转染技术将重组质粒pEGFP-N1-LKB1和pEGFP-N1质粒分别转染A549细胞。分别在转染12h，24h，36h，48h，60h，72h时，用MTT法检测LKB1对A549细胞的影响；并用Western blot检测LKB1和p53在A549细胞中的表达量变化。
　　 结果：成功构建pEGFP-N1-LKB1重组质粒并转染A549细胞。在转染pEGFP-N1-LKB1和pEGFP-N1的A549细胞中观察到绿色荧光；转染pEGFP-N1-LKB1的A549细胞生长受到明显抑制，尤其在24h-48h时；Western blot检测结果表明转染pEGFP-N1-LKB1重组质粒的A549细胞中重建了LKB1的表达，且p53总蛋白表达和积累水平明显增高。
　　 结论：在A549细胞中成功表达N端带有绿色荧光标签的LKB1蛋白，重组LKB1可能通过调节p53来抑制细胞增殖。