高压电晕电场对钝顶螺旋藻（节旋藻）SOD比活性影响研究

摘要

超氧化物歧化酶(SOD)属于金属酶类，普遍地存在于多类动物、植物以及微生物体内。SOD具有清除超氧阴离子能力，能够防御氧毒害性，减少氧自由基对生物机体的损害。SOD不仅具有重要的理论研究意义也有着巨大的实际应用价值和开发前景。利用诱变及相关技术可以有效解决螺旋藻环境适应能力较差、藻种退化较严重、成本偏高等急需解决的一些问题。目前关于高压电晕电场诱变育种对螺旋藻的影响研究较少。本文就利用高压电晕电场处理两种形态钝顶螺旋藻藻种，并比较突变藻的生长情况及SOD活性。实验结果:①藻种上浮性好，直线形藻种附壁现象非常明显。②高压电晕电场处理的螺旋藻生长速度较不处理的快，弯藻比直藻生长速度快。电晕电场处理120min生长速度最快。③电晕电场处理藻SOD粗酶比活性高于未经处理藻。弯藻粗酶比活性高于直藻。④藻体滤液盐析SOD比活性高于藻体盐析SOD。最高的一组6.0滤液提取SOD比活性比藻体提取SOD比活性高11倍，分别为2045.22U/mg和183.79U/mg。弯藻滤液精提SOD酶液比活性最高的一组为1.0，其外液提取酶比活性比藻体提取酶比活性高4.4倍。藻体精提SOD比活性电场处理2.0突变弯藻与8.0突变直藻明显高于其它组。⑤本实验藻种盐析SOD最适pH9.0;最适温度25℃～30℃;热稳定性和时间的稳定性都很强。⑥经SDS-PAGE变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，各样品均呈现明显双谱带，全酶分子量分别为47kD和52kD左右。

目录

声明

摘要

一、引言

1．1 鄂尔多斯钝顶螺旋藻营养成分及形态简介

1．1．1 钝顶螺旋藻简介

1．1．2 钝顶螺旋藻的形态学研究

1．2 超氧化物歧化酶(SOD)简介及其在各研究领域中的应用

1．2．1 SOD简介及分类

1．2．2 SOD的应用研究概况

1．2．3 SOD转基因及抗逆新品系育种等方面的研究

1．3 Fe-SOD结构、序列分析与基因克隆分析研究进展

1．4 SOD提取及活性测量方法比较

1．5 研究目的和意义

二、材料与方法

2．1 实验材料

2．2 实验仪器

2．3 实验药品和试剂

2．3．1 鄂尔多斯钝顶螺旋藻培养基

2．3．2 粗提SOD酶液试剂

2．3．3 钝顶螺旋藻提取SOD中水溶性蛋白质含量测定试剂

2．3．4 维生素C含量测定试剂

2．3．5 SOD比活性测量试剂

2．3．6 盐析精提SOD酶液试剂

2．3．7 SDS-PAGE变性聚丙烯酰胺凝胶电泳所需试剂

2．4 实验方法

2．4．1 鄂尔多斯钝顶螺旋藻的单克隆及其扩大培养

2．4．2 高压电晕电场处理不同形态的螺旋藻

2．4．3 测量两种不同形态螺旋藻藻种和突变藻的生长曲线

2．4．4 分别提取原藻和突变藻及其外液中的SOD粗酶

2．4．5 粗提SOD酶液Vc含量测定(紫外分光光度法)

2．4．6 螺旋藻及外液粗提SOD酶液中水溶性蛋白质含量及酶活力测定

2．4．7 SOD比活性计算公式

2．4．8 SOD硫酸铵分级盐析及精提酶液蛋白质含量及酶活力测定

2．4．9 SOD酶动力学研究

2．4．10 SDS-PAGE变性聚丙烯酰胺凝胶电泳

三、实验结果

3．1 两种不同形态钝顶螺旋藻的单克隆

3．2 高压电晕电场处理两种不同形态的螺旋藻藻种

3．2．1 固体培养基培养的两种形态螺旋藻及突变藻生长情况比较

3．2．2 液体扩大培养的螺旋藻突变藻的生长情况比较

3．2．3 高压电晕电场处理前后不同形态藻种上浮性及附壁现象

3．3 提取螺旋藻原藻和突变藻及其外液中的SOD粗酶

3．3．1 SOD粗酶提取液可溶性蛋白质含量

3．3．2 粗酶液Vc含量(μg·g1)

3．3．3 粗提SOD酶液酶活力

3．3．4 SOD比活性

3．3．5 钝顶螺旋藻滤液粗提SOD酶活力

3．4 SOD硫酸铵分级盐析及精提螺旋藻SOD酶液蛋白质含量及酶活力

3．5 SOD酶动力学研究

3．5．1 SOD盐析酶提取液最适pH

3．5．2 SOD盐析酶提取液最适温度

3．5．3 螺旋藻盐析SOD酶液热稳定性

3．5．4 SOD盐析酶提取液时间稳定性

3．6 SDS-PAGE变性聚丙烯酰胺凝胶电泳

四、分析讨论

4．1 高压电晕电场诱变机制及对SOD的活性影响讨论

4．2 SOD酶分子量及性质分析

参考文献

致谢