不同辅助孵化方式对小鼠囊胚孵化率的影响

摘要

辅助孵化(Assisted Hatching，AH)是一种能够帮助胚胎从透明带中孵出的技术。体外受精-胚胎移植（in vitro fertilization-embryo transfer，IVF-ET）过程中的着床率低下现象，一直是困扰人们的问题。临床上，运用AH技术能够有效提高囊胚孵化率以及胚胎着床率。目前，人工辅助孵化的方法主要有机械法、化学法、酶消化法、激光法以及压电脉冲(piezo)显微操作法。AH的具体操作方法包括对卵母细胞的透明带进行打孔或削薄等方法，进行辅助孵化处理时所选择的胚胎发育时期也各不相同。然而，究竟哪种AH方法最有效，选择哪一发育时期的胚胎进行AH操作能够得到最理想的效果，还没有具体研究。本实验利用piezo显微操作法，针对小鼠成熟卵母细胞及着床前各时期胚胎进行不同方式的AH处理，统计各种方法处理后胚胎的发育率和囊胚的孵化率，以探明最佳的AH处理方式。
　　本研究采用的AH方法分别为：透明带打小孔(small hole，SH)，开孔长度约为10μm；透明带打大孔（large hole，LH），开孔长度约为50μm；透明带削薄小区域(small length thinner，ST)，削薄区域直径约为50μm；透明带削薄大区域（large length thinner，LT），削薄区域直径约为120μm。选择不同发育时期的卵母细胞或胚胎分别进行AH处理，各时期分别为：MⅡ期卵母细胞；IVF体外培养得到的2-cell胚胎；IVF体外培养得到的4-cell胚胎；IVF体外培养得到的桑椹期胚胎。结果表明：不同AH方法中，SH处理后囊胚孵化率较高，且多数胚胎为不完全孵出;LT处理后胚胎完全孵化率较高。我们的结果还表明在桑椹胚期进行AH处理效果最好。本实验的结论为:利用piezo对小鼠着床前胚胎进行辅助孵化处理，在桑椹胚期进行SH处理可以获得最高的囊胚孵化率。该研究将为临床上人类胚胎的辅助孵化技术提供基本依据。

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摘要

缩略词表

第一章 实验研究

1．1 引言

1．2 实验材料

1．2．1 实验动物

1．2．2 主要设备

1．2．3 实验试剂

1．3 实验方法

1．3．1 卵母细胞的采集

1．3．2 孤雌激活和体外受精

1．3．3 AH处理

1．3．4 数据统计分析

1．4 实验结果及分析

1．4．1 相同的胚胎时期进行不同的AH方式

1．4．2 不同的胚胎时期进行相同的AH方式

1．5 讨论

参考文献

第二章 文献综述 辅助孵化的研究进展

附录

致谢

攻读学位期间已发表学术论文