胡椒酸分子探针的合成及特异性靶标确定的研究

摘要

降血脂是防治心脑血管疾病和动脉粥样硬化的重要手段之一,药物治疗能够降低病人血清胆固醇含量的同时明显降低心血管疾病的致死率.哺乳动物胆固醇生物合成中能够产生一种还原酶有效抑制剂,他汀类药物来源于此抑制剂,因此能够降低血脂并起到预防和治疗心血管疾病的目的,于是得到了最广泛的临床应用.然而,他汀类药物具有不良的副作用,因此,研究开发低毒,高效的降血脂新药对我国的人口健康有着非常重要的价值.
　　天然产物荜茇中提取得到的荜茇宁具有显著的降血脂作用且毒性远低于他汀类药物,本论文首先以丁二酸酐、炔丙胺盐酸盐,N-Boc-L-赖氨酸甲酯盐酸盐、胡椒酸(GBH)、4-(2-氨乙基)苯磺酰氟盐酸盐、对叠氮苯甲醇为原料,经过一系列的生物有机化学合成的方法合成了含有胡椒酸活性基团、光交联基团以及炔基基团的四种不同类型的具有光反应活性的小分子探针,并通过核磁共振波谱以及质谱手段进行了检测与分析,证明了我们得到的这四种小分子探针;其次,通过MTT法细胞毒性实验证明合成的四种活性小分子的毒性均在药物所使用的范围内;然后,从小鼠肝脏组织中提取总蛋白,并通过BCA法检测总蛋白的浓度在使用范围内,接着采用生物正交(bio-orthogonal)反应(Cu催化的

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绪论

降血脂药物研究背景

1.2 天然活性小分子靶标蛋白鉴定方法概述

1.3 活性蛋白表达谱概述

1.3.1 活性蛋白表达谱（ABPP）简介

1.3.2 活性蛋白表达谱化学探针（ABP）的设计

1.3.3 针对丝氨酸水解酶（Serine Hydrolases）的活性分子探针

1.3.4 活性蛋白表达谱（ABPP）的应用

1.4 本课题选题背景以及研究内容

1.4.1 课题选题背景

1.4.2 课题研究内容

第二章 胡椒酸分子探针的化学合成及化学表征

2.1 实验材料及方法

2.1.1 实验所用药品与试剂

2.1.2 实验仪器

2.1.3 实验方法

2.2 溶剂的前处理

2.3 胡椒酸分子探针的合成

2.3.1 GBH-AEBSF探针的合成

2.3.2 Ctrl-AEBSF探针的合成

2.3.3 GBH-N3 探针的合成

2.3.4 Ctrl-N3 探针的合成

2.3.5 GBH-AEBSF 探针的点击反应

2.4 化合物的表征

2.4.1 核磁共振波谱

2.4.2 质谱

2.4.3 质谱（Q-Tof）

2.5 结果与讨论

2.5.1 核磁共振波谱分析

2.5.2 质谱分析

2.6 本章小结

第三章 胡椒酸分子探针特异性靶标的确定

3.1 实验材料及仪器

3.1.1 实验所用材料

3.1.2 实验仪器

3.2 细胞培养

3.2.1 细胞复苏

3.2.2 细胞传代

3.2.3 细胞冻存

3.3 样品的准备

3.4 化合物的毒性检测

3.4.1 细胞毒性实验步骤

3.4.2 ABPP探针毒性检测结果

3.5 小鼠肝脏组织中提取总蛋白

3.6 BCA 法检测总蛋白浓度

3.7 ABP 探针标签的引入及蛋白质的富集

3.8 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）

3.9 本章小结

第四章 结论与展望

实验数据

参考文献

附录

致谢