实时荧光PCR技术检测中草药青蒿及马铃薯丛枝植原体的研究

摘要

中草药青蒿(ArtemisiaannuaL.)，是我国独有的抗疟药用植物资源。马铃薯丛枝植原体(Potatowitches'-broomphytoplasma，PWB)，为我国出入境有害生物检疫对象。在出入境检验检疫中，应对这两种生物进行严格检疫。 本研究分别根据蒿属植物rDNAITS序列及植原体16SrDNA序列多态性设计特异性TaqMan探针及引物，通过实时荧光PCR方法对黄花蒿及马铃薯丛枝植原体进行检测，取得了以下研究进展。 1.本文对9种蒿属植物的ITS序列和13种植原体的16SrDNA序列进行了测定及比对，分别根据特异性位点设计探针—引物组，对A.annua及PWB进行实时荧光PCR检测。两组试验结果表明，两组探针—引物分别对黄花蒿和马铃薯丛枝植原体有很强的特异性，除黄花蒿和马铃薯丛枝植原体外，作为对照的其余8种蒿属材料和19种病原物均未检测到荧光信号。 2.对实时荧光PCR检测体系的优化试验结果表明，检测效果在镁离子浓度为3mM，探针浓度为0.5μM，引物浓度为0.4μM时为最佳。 3.通过对不同浓度马铃薯丛枝植原体质粒的实时荧光PCR和常规PCR扩增，发现实时荧光PCR检测灵敏度比常规PCR高约100倍，能很好地避免假阴性结果。本研究在国内首次建立了对中草药青蒿和马铃薯丛枝植原体的TaqMan实时荧光PCR检测体系，并获得很好的检测结果。该方法快速、灵敏、特异、安全，为农业生产部门及检疫部门提供了有力的技术支持和科学保障。

目录

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摘要

第一章文献综述

第二章材料与方法

第三章结果与分析

第四章结论与讨论

参考文献

附录

致谢

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