无梗五加果实多糖的提取分离纯化及生物活性研究

摘要

本文分别采用热水浸提法、超声波浸提法及微波浸提法对无梗五加果实中多糖的提取工艺进行了研究。利用正交试验确定了水浸提最佳参数：浸提温度80℃、料液比(g/mL)1：70、浸提时间3h，提取三次的多糖得率为2.99％。在摸索微波浸提法与超声波浸提法提取无梗五加果多糖的实验中发现，此二种方法与水浸提法相比不能显著提高多糖得率，但二者皆可缩短提取时间，提高提取效率。 多糖浸提液浓缩醇沉后得到黑褐色粗多糖，将粗多糖样液进行酶解，然后利用三氯乙酸-Sevag法脱蛋白一次，Sevag法脱蛋白处理约8次至中间层无变性蛋白，双氧水脱色后得到淡黄色精多糖ASP。精多糖的紫外光谱显示在260m及280nm波长下无吸收峰，硫酸-咔唑反应为阳性，费林试剂反应、碘-碘酸钾反应、茚三酮反应、三氯化铁反应、双缩脲反应、黄蛋白反应为阴性，说明经此法提取的精多糖ASP是一种不含单糖、淀粉、酚类、蛋白及核酸的酸性多糖。 ASP经DEAE-52纤维素离子柱层析得到1个水洗脱组分和3个盐洗脱组分，收集相同峰位组分，减压浓缩后，蒸馏水透析48h，40℃真空干燥得淡黄色多糖。多糖主要组分ASP-B2经HPLC检测，由5个洗脱峰组成，其分子量分别为：179512.42、21038.95、11568.00、7671.61、4317.53。 将ASP和ASP-B2水解，经HPLC分析发现，ASP主要单糖组成为：核糖(37.081％)、果糖(16.05％)、甘露糖(12.766％)、半乳糖(34.103％)共4种单糖，其中以核糖和半乳糖含量居多，二者含量相差不大；ASP-B2为酸性多糖，主要单糖组成为：甘露糖(7.30％)、氨基葡萄糖(5.99％)、鼠李糖(9.46％)、葡萄糖醛酸(4.50％)、半乳糖醛酸(16.87％)、葡萄糖(20.20％)、半乳糖(22.92％)、木糖(5.11％)和岩藻糖(7.65％)共9种单糖，其中葡萄糖和半乳糖居多，其次为鼠李糖9.46％。 在无梗五加多糖的抑菌实验中发现，无梗五加精多糖ASP对大肠杆菌、枯草杆菌及根霉均有不同程度的抑制作用，但粗多糖仅对枯草杆菌及根霉有抑制作用，两种多糖都对金黄色葡萄菌和黑曲霉没有抑制作用。在多糖抗氧化实验中发现，无梗五加多糖对猪油有明显的抗氧化作用，ASP-1、ASP-2对羟基自由基(·OH)和超氧阴离子自由基(O-2·)均有一定清除作用，且对·OH的清除能力远远大于其对O-l·的清除能力。但ASP仅对·OH有一定的清除作用。通过动物实验发现无梗五加果多糖可增加小鼠脾脏重量和碳性廓清的作用，说明无梗五加果多糖具有增强体液免疫调节作用。

目录

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摘要

第一章前言

第二章无梗五加果实多糖成分的分离提取

第三章无梗五加多糖的分离纯化

第四章无梗五加果实多糖的生物活性研究

参考文献

致 谢

攻读硕士学位期间发表文章