葛根素对大鼠急性酒精性肝损伤保护作用的实验研究

摘要

随着人民生活水平的提高，过量饮酒及酗酒现象日益增多。过度饮酒相关问题是一个世界各国都极为关注的社会公共卫生问题。据统计10％-20％酗酒者有不同程度酒精性肝病。近年来酒精性肝病发病及死亡情况在我国呈迅速增长趋势。酒精中毒时β-内啡肽(β-EP)释放增加，谷胱甘肽-S-转移酶(GST)对反映肝损伤具有较好的敏感性和特异性，丙二醛(MDA)可反映肝脏氧化应激的程度，P-选择素(P-selectin)是介导细胞间相互作用和炎症反应的重要介质。葛根素(Puerarin.Pue)是葛根的主要有效成分之一，临床用于治疗心、脑血管病等疾病，疗效良好。据记载，葛根素有解酒之功效，但其临床应用及基础研究还很少。为此，我们对葛根之主要提取物——葛根素进行了实验研究，观察急性酒精中毒对大鼠谷胱甘肽-S-转移酶、丙二醛、β-内啡肽、P-选择素及肝组织病理学的影响，以及葛根素对急性酒精性肝损伤的干预作用，为葛根素的临床应用提供实验和理论依据。 材料与方法:1.动物与药物健康成年Wistar大鼠24只，雌雄对半，体重150-200g；无水酒精，将其稀释为40％浓度，按8g/kg.d灌胃；葛根素注射液；β-EP试剂盒；GST试剂盒、MDA试剂盒；P-selectin试剂盒。 2.实验仪器：FJ-2008PSγ放射免疫计数仪，Beckman.DU640分光光度计，BIO-RADModel550酶标仪。 3.分组及实验方法：将大鼠随机分为3组，每组8只。A组(对照组)：生理盐水腹腔注射(ip.)和灌胃(ig.)；B组(模型组)：等量生理盐水ip.，40％酒精8.0g/kg.d.ig.，连续5天；C组(葛根素组)：葛根素200mg/kg.d.ip.，相同剂量酒精ig.，连续5天；各组最后一次处理后取血，迅速留取肝组织。检测血清GST、MDA、P-selectin，血浆β-EP及肝组织匀浆GST、MDA水平。肝组织于普通光学显微镜及电镜下观察病理改变。 4.统计学处理：有关测定数据以(x)±s表示，SPSS10.0统计软件包处理，t检验及方差分析检验相关数据之间的差异性，P＜0.05差异有显著性，P＜0.01差异有非常显著性。 结果1.一般情况对照组大鼠鼠毛光泽，反应敏捷，营养状态良好；模型组大鼠毛色晦暗，委靡，略为瘦弱；葛根素组大鼠比模型组毛色略好、反应较快、营养状态尚可。 2.葛根素对急性酒精中毒大鼠血清GST、MDA、P-selectin及血浆β-EP水平的影响 模型组大鼠血清GST、MDA、P-selectin及血浆β-EP水平明显地高于对照组(GST、β-EP：P＜0.01，MDA、P-selectin：P＜0.05)；葛根素组GST、MDA、β-EP、P-selectin水平较酒精中毒组显著降低(P＜0.05)。 3.葛根素对急性酒精中毒大鼠肝组织匀浆GST、MDA水平影响模型组大鼠肝组织匀浆GST、MDA水平明显地高于对照组(MDAP＜0.05；GSTP＜0.01)；葛根素组GST、MDA水平较模型组显著降低(P＜0.05)。 4.葛根素对急性酒精中毒大鼠肝组织病理的影响4.1光镜改变对照组肝细胞及组织结构基本正常。模型组肝小叶结构不清，肝索紊乱，肝窦僵硬，肝细胞广泛脂肪变性、浊肿并气球样变，可见局灶性坏死。葛根素组肝小叶结构尚清，肝细胞索排列成放射状，基本整齐，肝窦基本正常，肝细胞浊肿明显减轻，可见少量脂滴。 4.2电镜改变对照组肝细胞形态结构基本正常。模型组可见胞浆内脂变，内质网扩张，糖原明显减少，线粒体增大畸形、嵴断裂，细胞核电子密度增强，异染色质呈团块状集聚在核的周边，胞质内细胞器明显减少，出现空泡样改变。葛根素组肝细胞有少许脂滴，少数线粒体肿胀，糖原略减少。 讨论:短时期大量摄入酒精可引起急性酒精性肝损伤。本实验结果显示急性酒精中毒使大鼠血清及肝组织GST、MDA升高，肝组织病理损伤，肝细胞浊肿、脂肪变性、坏死，纤维结缔组织增生，考虑其损伤机制与酒精致肝脏氧化代谢的改变，产生大量自由基引起肝细胞脂质过氧化所致损伤有关。予葛根素预处理后可抑制酒精中毒大鼠MDA、GST水平升高，肝组织细胞浊肿、脂变明显减轻，病理损伤显著改善，提示葛根素有拮抗急性酒精中毒所致的氧化应激，有保护肝组织细胞，改善肝功能的作用。本实验中模型组大鼠β-EP水平明显升高，葛根素组β-EP水平较模型组显著降低，考虑肝损伤可能与β-EP可明显抑制肝细胞鸟氨酸脱羧酶活性，从而抑制肝内蛋白质合成有关，葛根素可通过抑制β-EP的释放改善肝功能。P-selectin可介导活化内皮细胞、血小板与中性粒细胞、单核细胞相互作用，与免疫损伤、炎症等密切相关，我们的研究发现模型组大鼠血清P-选择素水平增高，葛根素对其升高有抑制作用，其作用机制尚待进一步研究。 结论:急性酒精中毒可引起急性肝损伤，血清及肝组织匀浆GST、MDA水平升高，肝组织病理学损害。葛根素可通过抗自由基、减轻脂质过氧化、抑制β-EP、P-selectin的释放等方面对急性酒精性肝脏伤有保护作用，可应用于临床治疗酒精中毒。

目录

中国医科大学研究生学位论文独创性声明及版权使用授权书

中文论著摘要

英文论著摘要

英文缩略语

前 言

材料与方法:

结果

讨 论

结 论

本研究创新性的自我评价

参考文献

综 述 急性酒精中毒的诊断与治疗研究进展

在学期间科研成绩

致 谢

个人简介