小鼠皮肤切创愈合过程中c-jun表达及其与损伤时间相关性的研究

摘要

目的：皮肤损伤愈合是一个复杂而连续的过程，包括血液成分凝集、炎症、肉芽组织形成、新生上皮覆盖、结缔组织收缩和纤维化等过程。原癌基因c—jun是即刻早期基因jun家族成员之一，属于碱性亮氨酸拉链家族核内转录因子成员，可以结合在许多基因的启动子上参与基因转录的调控，其表达产物在多种基因表达、细胞凋亡、增殖、分化等过程中起重要作用。本研究应用免疫组织化学染色和Western blot技术，检测小鼠皮肤损伤区在损伤后不同时间段c—jun表达的变化情况，探讨c—jun在皮肤损伤愈合中的作用及其在损伤时间推断上应用的可能性。 方法：健康成年(8周龄)清洁级昆明系小鼠55只，雌雄不限，体质量35～40g，随机分为11组。其中皮肤切创分为10个时间段组，另一组为正常对照组，每组均为5只小鼠。乙醚气体吸入麻醉，背部剪毛处理后，常规手术消毒，在背部中央做一纵行长1.5cm皮肤全层切口，深达筋膜。分别于伤后0h、3h、6h、12h、1d、3d、5d、7d、10d和14d将小鼠脱颈椎处死，取伤口处1.5cm×1.0cm皮肤组织。对照组小鼠麻醉后背部剪毛，不做切创，观察至14d，脱颈椎处死，取相同部位同等大小皮肤，以备HE染色、免疫组织化学染色和Western blot检测应用。应用免疫组织化学染色和Western blot技术检测55例小鼠皮肤切创后各时间段c—jun变化情况，以非切创小鼠皮肤组织作对照，显微镜×400倍下，在损伤区及损伤周边区随机选取10个视野，计数细胞总数、阳性细胞数及阳性细胞率。应用FluochemV2.0软件检测各时间段的平均光密度值，测得数据用均数±标准差(x±s)表示。用SPSS13.0 for Windows进行单因素方差分析，以P<0.05为差异有统计学意义。 结果：正常对照组小鼠皮肤中c—jun主要表达在表皮、毛囊和皮脂腺等处。伤后3h即可见少数多核粒细胞有c—jun表达。伤后6—24h，大量浸润的多核粒细胞和部分单个核细胞c—jun呈阳性。伤后1～3d，c—jun阳性细胞主要以单个核细胞和成纤维细胞为主。伤后5～14d，c—jun主要在成纤维细胞中表达。伤后0h时c—jun阳性细胞率比较低，随着伤后时间的延长，c—jun阳性细胞率逐渐增加，12h达到高峰。伤后1～5d一直呈高表达状态。伤后7d时c—jun阳性细胞率达到第二峰，随后逐渐下降。除伤后1d与3d阳性细胞率差异无统计学意义外(P>0.05)，其它各组与相邻上组的细胞总数及阳性细胞率差异均有统计学意义(P<0.05)。Western blot结果显示正常对照皮肤内有c—jun阳性条带，皮肤切创伤后各时间段组c—jun表达强度有一定规律。伤后0～12h，表达逐渐增强；12h达高峰。1～5d稍有下降；伤后7d，c—jun表达稍有上升，随后表达渐降低。但12h组中c—jun表达相对较多，到14d时，c—jun基本与对照组表达情况一致。除0h与对照组间平均光密度值差异无统计学意义外(P>0.05)，其余各组间平均光密度值差异均具有统计学意义(P<0.05)。 结论：1、正常对照组小鼠皮肤的表皮、毛囊及皮脂腺中表达c—jun。2、小鼠皮肤切创愈合过程中多核粒细胞、单个核细胞及成纤维细胞均表达c—jun。3、小鼠皮肤切创愈合过程中c—jun对诱导多核粒细胞、单个核细胞及成纤维细胞的凋亡可能起着重要作用。4、小鼠皮肤切创愈合过程中c—jun表达的规律性变化可用于皮肤切创损伤时间的推断。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：英文缩略语

声明

前言

实验材料与方法

实验结果

讨论

结论

本研究创新性的自我评价

参考文献

综述：c-jun在疾病与组织损伤中的作用

在学期间科研成绩

致谢

个人简介