锌对增殖期大鼠生长板软骨细胞ZnT-7表达的影响

摘要

目的：
　　 研究锌对增殖期大鼠生长板软骨细胞(RGC)ZnT-7表达的影响及其规律。
　　 方法：
　　 用wista大鼠进行体外培养培养大鼠肋生长板软骨细胞,并用0、5、10和20μmol/L的锌螯合剂TPEN[N,N,N’,N’-Tetrakis(2-pyridylmethyl)ethylene-diamine]分别处理培养RGC细胞12 h。造成细胞内缺锌。采用流式双染试剂盒(AnnexinV-FITC/PI)研究早期凋亡和晚期凋亡细胞百分比。利用免疫荧光技术对ZnT-7进行定位研究,QRT-PCR和Western Blot的方法检测ZnT-7的表达。
　　 结果：
　　 TPEN对增殖期大鼠生长板软骨细胞增加早期凋亡和晚期凋亡细胞百分比,随着TPEN浓度的增加而增加。免疫荧光结果显示ZnT-7在增殖期大鼠生长板软骨细胞中有较强的表达并且定位于高尔基体上；实时定量PCR显示；不同浓度的TPEN处理增殖期大鼠生长板软骨细胞其结果也略有不同,5μmol/L(TPEN)组与对照组相比略有增高,而10μmol/L、20μmol/L组与对照组相比逐渐降低。Western Blot的结果从蛋白水平上也证明了这一趋势。实验重复3次,数据以(x)±s表示,采用SPSS11.0统计软件,t检验方差分析检验数据,以P<0.05为差异有统计学意义。
　　 结论：
　　 ZnT-7受到锌离子浓度的调控,同时在缺锌的条件能够明显增加细胞的早期凋亡和晚期凋亡。

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