XIAP及其相关因子XAF1在慢性粒细胞白血病中的表达研究

摘要

目的:慢性粒细胞白血病(CML)是慢性骨髓增生性疾病中最常见的一种,属于造血干细胞恶性增殖性疾病。X-连锁调亡抑制蛋白(XIAP)是IAP家族的重要成员,与细胞的生长、分化与凋亡密切相关。既往研究表明XIAP的高表达是肿瘤预后不良的标志,而XAF1作为XIAP抑制性调节因子,在肿瘤细胞中低表达或不表达,剂量依赖性拮抗XIAP的活性,减少XAF1的表达可能是恶性肿瘤细胞对凋亡耐受而存活的关键原因。
　　 本研究通过实时荧光定量PCR方法观察凋亡抑制蛋白XIAP及XAF1在CML中的表达情况,在国内外文献中未见报道,本研究将进一步评估二者在CML诊断、疾病进展及预后分析中的应用价值。
　　 方法:
　　 一、选取研究对象
　　 CML患者42例,其中慢性期24例(CML慢性期组),进展期18例(CML进展期组,其中加速期7例及急变期11例),非恶性血液病患者21例,急性白血病患者24例。
　　 二、实时荧光定量PCR
　　 收集患者骨髓单个核细胞,提取总RNA,按试剂盒说明书配置逆转录反应体系合成cDNA,引物由Takara公司设计合成,采用SYBRGreenⅠ实时定量荧光PCR方法,以GAPDH为内参照,进行SYRB GreenⅠ实时荧光定量PCR,检测XIAP及XAF1的表达水平。
　　 三、结果判断
　　 根据实时荧光定量PCR得到Ct值,通过标准曲线计算得出XIAP、XAF1及GAPDH基因的拷贝数,通过XIAP、XAF1与内参基因GAPDH的拷贝数比值算出XIAP与XAF1的相对表达水平。
　　 四、统计学分析
　　 采用SPSS16.0软件进行分析,实验结果应用秩和检验分析,P＜0.05为差异有统计学意义。
　　 结果：
　　 一、方法的可靠性和准确性
　　 1、RNA的纯度和质量分析所提取的总RNA经紫外分光光度计检测,比值在1.8-2.0之间,经琼脂糖凝胶电泳鉴定,条带清晰可见,无明显降解。
　　 2、扩增的特异性及定量的准确性标准品cDNA经梯度稀释后进行PCR反应,制作标准曲线。得到的标准曲线相关系数(r2)均＞0.998,斜率在-3.3至-3.5之间,反映定量准确,扩增效率良好。扩增后溶解曲线显示锐利的单一锋,无其他非特异性锋,说明扩增产物均一,无非特异扩增及引物二聚体。琼脂糖凝胶电泳进一步验证扩增片段的均一性及长度。
　　 二、XIAP及XAF1的表达
　　 CML进展期组患者骨髓中XIAP表达水平高于CML慢性期组和非恶性血液病组;而CML进展期患者骨髓中XAF1表达水平低于CML慢性期和非恶性血液病组;化疗后获得骨髓缓解的CML患者骨髓中XIAP的表达水平显著低于化疗前,而XAF1的表达水平显著高于化疗前。应用Spearman相关分析,CML患者XIAP和XAF1的表达水平之间呈负相关。
　　 结论：XIAP在慢性粒细胞白血病中表达水平明显升高,且进展期患者显著性高于慢性期患者;而XAF1表达水平明显减少,且进展期患者显著性低于慢性期患者;表明XIAP及XAF1对CML的发生、发展起着重要作用;且XIAP及XAF1存在明显负相关,表明CML患者XIAP及XAF1的联合检测及动态观察可作为CML临床辅助诊断、分期及预后判断的指标之一。

目录

文摘

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论文说明:英文缩略词

前言

材料与方法

结果

讨论

结论

本研究创新性的自我评价

参考文献

综述 XIAP及XAF1肿瘤研究中的现状及进展

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