GC-MS筛查尿中单糖及其在临床诊断中的应用

摘要

目的:
　　 近年来，GC-MS常被应用于代谢疾病的研究，并且取得了令人瞩目的成果。代谢疾病是指体内生物化学过程发生障碍时，某些代谢物质如糖、脂肪、蛋白质、嘌呤、钙铜等堆积或缺乏而引起的疾病。糖尿病(Diabetes mellitus，DM)是一种常见的内分泌代谢疾病，近年来有发病率逐年上升及年轻化的趋势，全球目前有超过1.5亿糖尿病患者，到2025年这一数字将增加一倍[1]。因此，对于糖尿病人群进行有目的的筛查以便早期诊断和治疗具有非常重要的意义。本研究采用对尿液进行硅烷化前处理的方法，建立了GC-MS检测尿液中的单糖及其相关代谢物的方法，该实验准确、灵敏度高、特异性强，避免了临床上生化检测中出现的假阴（阳）性结果。并实现了一次检测多种物质，大大提高了遗传代谢病的检测效率，是筛查遗传代谢病的有效手段。因此在临床应用方面将会有很高的应用价值和推广前景。
　　 方法:
　　 取0.1ml尿液于试管中，加尿素酶20μl室温放置隔夜处理，加入0.5ml乙腈和5μl内标溶液，涡旋震荡1min，加饱和NaCl200μl，混匀，离心5min，取上层至氮气下吹干，加N，O-双（三甲基硅烷）三氟乙酰胺(BSTFA)衍生化试剂10μ1微波衍生10min，冷却至室温后，氮气吹浓缩，加20μl正己烷，进样1μl供GC-MS分析。
　　 结果:
　　 利用硅烷化衍生试剂N，O-双（三甲基硅烷）三氟乙酰胺(BSTFA)对单糖进行处理，单糖葡萄糖五个羟基上的氢原子均被三甲基硅烷取代，取代产物极性降低，可供GC-MS分析，其线性关系良好。同时尿液中的其他代谢物质均被衍生化，我们对有机酸类物质进行半定量研究，结果表明其含量低于于正常人群，为临床上早期诊断糖尿病及其它代谢疾病提供了可靠依据。
　　 讨论:
　　 尿液作为检测单糖的生物样本有很多优点，例如尿液是一种无创性生物样品，避免了抽血给患者带来的身体和精神上的创伤。尿液作为体内排泄物，能反应近期的生理情况。并且受外在环境影响小，易于获得、储存和运输，因此常用于临床普查。
　　 本方法检测限高，可以检查出来非常轻微的糖尿病，同时可以监视糖尿病病人的治疗状态，可以预示糖尿病病人的合并症，可以指导糖尿病的治疗。
　　 在我们的预实验过程中，我们针对同一个生物样品的衍生化时间及衍生化试剂用量进行考察，结果显示衍生时间与用量均在10min与10μ1时产物与内标峰面积比最大，适于样品分析。
　　 对糖尿病患者的葡萄糖检测实验中，除了葡萄糖的含量高于正常组外，其它代谢物也均被衍生化，我们对其进行半定量，发现代谢产物含量与糖尿病疾病相关。
　　 结论:
　　 本文采用对单糖进行硅烷化衍生化法，优化了样品前处理过程，降低了单糖的极性，并且增大其挥发性，提高了检测的灵敏度，适用于GC-MS检测。该方法使我们能够同时检测尿液样品中的其他代谢物质，能在临床早期诊断和代谢疾病预防方面有一定的帮助作用，特别适用于代谢疾病的病前筛查及病后监测。

目录

文摘

英文文摘

英文缩略语

论文 GC-MS筛查尿中单糖及其在临床诊断中的应用

前言

材料与方法

实验结果

讨论

结论

本实验的创新性自我评价

参考文献

综述 葡萄糖测定的研究进展

参考文献

在学期间科研成绩

致谢

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