PI3K抑制剂wortmannin对卵巢癌细胞Survivin和Caspase-3蛋白活性的影响

摘要

目的：
　　 卵巢癌是女性生殖器常见的三大恶性肿瘤之一，因缺乏有效的早期诊断方法，诊断时多为晚期，大量国内外临床资料显示，卵巢癌患者的五年生存率仅为25％～30％，随着近代宫颈癌及子宫内膜癌诊治进展，卵巢癌已成为严重威胁妇女生命和健康的主要肿瘤，究其原因，是70％以上的卵巢癌诊断时，病变范围已超出卵巢，发生转移。卵巢恶性肿瘤的治疗原则是手术为主，辅以化疗、放疗及其他综合治疗，其中化疗为主要的辅助治疗手段。因卵巢恶性肿瘤对化疗较敏感，即使已广泛转移也能取得一定疗效，既可用于复发，也可用于术后有残留癌灶患者，可缓解症状延长存活期。
　　 但是近年来随着卵巢癌化疗耐药问题的不断出现，严重影响了卵巢癌的治疗效果。大量对卵巢癌细胞系和动物模型的研究已经证明，PI3K/AKT信号通路异常活化与卵巢癌化疗耐药有关，抑制该通路可以明显增加化疗药物的抗肿瘤效应，而且副作用亦有所减小。临床和实验研究证明wortmannin是PI3K的特异性抑制剂，它能间接抑制痛细胞的讯息传递，使得癌细胞无法生长而让肿瘤变小或消失。本实验拟观察wormannin对卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响，分析其抑制肿瘤生长的机制。
　　 本实验通过检测经PI3K抑制剂wortmannin作用后卵巢癌细胞系CAOV3中凋亡调控因子（survivin蛋白）和半胱氨酸门冬氨酸蛋白酶-3（caspase-3蛋白）的表达及变化情况，初步探究PI3K/AKT信号传导通路影响卵巢癌细胞增殖及凋亡的机制，为卵巢癌的治疗提供新的实验依据。
　　 方法：
　　 1、实验方法
　　 应用western blot方法检测经不同浓度wortmannin(0、100、300、500nmol/L)作用以及作用不同时间(0、6、12、36h)后，卵巢癌细胞系CAOV3中survivin蛋白及caspase-3蛋白的表达及变化趋势，同时检测二者之间的相关性。
　　 2、统计学方法
　　 实验数据采用SPSS13.0统计软件进行独立样本t检验及相关分析，P＜0.05表示差异有统计学意义；实验数据取三次独立实验数据的平均值。
　　 结果：
　　 1、药物浓度梯度实验：卵巢癌细胞系CAOV3经不同浓度wortmannin作用后，caspase-3蛋白随着wortmannin作用浓度增加呈递增式表达，而survivin蛋白随着wortmannin作用浓度增加表达则逐渐减弱，100nmol/L wortmannin组survivin蛋白的表达强度约为0nmol/L组的1/2，两组之间的统计学差异较survivin蛋白其他相邻组间差异更为明显（P＜0.01）。
　　 2、药物时间梯度实验：卵巢癌细胞系CAOV3经300nmol/L wortmannin作用不同时间后，caspase-3蛋白随着wortmannin作用时间延长呈递增式表达，作用累及12h时，caspase-3蛋白的表达强度约为0h的2.5倍；Survivin蛋白则随着wortmannin作用时间延长表达逐渐减弱。
　　 3、caspase-3与survivin蛋白在卵巢癌细胞系CAOV3中的表达具有对应性，随着wortmannin作用浓度增加、作用时间延长，caspase-3蛋白表达上调，survivin蛋白表达下调。
　　 结论：
　　 在卵巢癌细胞系CAOV3中，wortmannin增强凋亡蛋白caspase-3表达，且与作用浓度及作用时间呈正相关；wortmannin抑制存活蛋白survivin表达，且与作用浓度及作用时间呈负相关；应用wortmannin后，卵巢癌细胞系CAOV3的survivin蛋白和caspase-3蛋白的表达变化呈负相关；wortmannin通过抑制survivin蛋白表达、增强caspase-3蛋白表达，从而抑制卵巢癌的发生发展。