KISS1基因对肾癌Caki-1细胞侵袭能力的影响及其在肾癌中表达改变的机制

摘要

目的:
　　 肾癌，约占肾脏恶性肿瘤的85％，是泌尿系中最常见的恶性肿瘤之一，仅次于膀胱肿瘤。既往肾癌就诊时20％～35％已有转移，6％～15％是因为转移症状而就诊[1]，加强对肾癌转移的分子机制的研究尤为重要。KISS-1基因是一个肿瘤转移抑制基因，能明显抑制肿瘤细胞的化学趋向性和侵袭性，并限制肿瘤细胞的迁移蠕动功能[2,3]。本研究拟检测KISS1基因在未转移和伴转移肾癌组织中的表达，明确其发生表达改变的原因;研究KISS1基因表达改变对肾癌Caki-1细胞侵袭能力的影响，以及对肾癌转移相关基因基质金属蛋白酶9(matrix metallopeptidase-9，MMP-9)和上皮细胞钙粘蛋白(epithelia cadherin，E-cadherin)表达的调节作用。
　　 方法:
　　 本研究将应用Real-time PCR检测65例原发未转移和31例原发伴转移的肾癌组织中KISS-1基因的表达，研究KISS-1基因与肾癌转移的相关性;转染真核表达载体pIRES2-KISS1至肾癌Caki-1细胞，随后应用Transwell小室法检测KISS-1基因过表达的肾癌Caki-1细胞的侵袭能力，并应用western blot检测KISS-1基因过表达的肾癌Caki-1细胞中MMP-9和E-cadherin的表达改变。
　　 Real-time PCR检测原发未转移和原发伴转移的肾癌组织中TCF21和microRNA-21(miR-21)基因的表达，分别研究二者与KISS-1基因表达的相关性;上调Caki-1细胞TCF21基因的表达，western blot检测TCF21基因的过表达对KISS-1蛋白表达的影响;应用pre/anti-miR-21转染Caki-1细胞，改变其中miR-21的表达，Real-time PCR检测TCF21基因的表达;荧光素酶报告基因分析研究miR-21对TCF21基因是否具有转录后调节作用。
　　 结果:
　　 1、肾癌组织中KISS1 mRNA的表达Real-time PCR检测显示，原发伴转移肾癌组织中KISS-1 mRNA较原发未转移肾癌组织明显下调。
　　 2、KISS1基因过表达对Caki-1细胞侵袭能力的影响Western blot检测证实，pIRES2-KISS1能够显著上调Caki-1细胞中KISS1基因的表达。而KISS1基因过表达能够显著地抑制Caki-1细胞的侵袭能力，而且KISS1沉默组细胞中MMP9和E-cadherin蛋白的表达分别呈现显著的下调和上调。
　　 3、TCF21调控KISS1基因表达Real-time PCR结果显示，TCF21在原发伴转移肾癌组织中的表达明显下调，为原发未转移肾癌组织中，而且TCF21与KISS1 mRNA的表达水平呈明显正相关。在肾癌Caki-1细胞中，TCF21表达沉默能显著下调KISS1蛋白的表达。
　　 4、miR-21调控TCF21基因表达应用TargetScanHuman5.1等软件，预测TCF21基因是miR-21的靶基因，在TCF21 mRNA-3'UTR有miR-21结合位点。Real-time PCR检测发现，原发伴转移肾癌组织中miR-21较原发未转移肾癌组织明显上调。而且miR-21与TCF21的表达水平呈明显负相关。miR-21前体能够显著降低TCF21基因的表达。荧光素酶报告基因表达分析证实miR-21能够与TCF21基因3'UTR结合，负性调控TCF21基因的表达。
　　 结论:
　　 1、KISS1基因在伴有转移的肾癌组织中表达显著下调。
　　 2、KISS1基因过表达能够显著抑制肾癌细胞的侵袭能力，并能够分别下调和上调转移相关基因MMP9和E-cadherin的表达，具有肾癌转移抑制基因的作用。
　　 3、miR-21在伴有转移的肾癌组织表达上调;miR-21在肾癌细胞中能够与TCF21基因3'UTR结合，在转录后水平负性调控TCF21基因的表达。
　　 4、TCF21在伴有转移的肾癌组织表达下调;TCF21转录因子能够上调KISS1基因的表达。
　　 5、miR-21和TCF21的表达异常是KISS1基因在伴有转移的肾癌中表达下调的原因之一。

目录

声明

摘要

英文缩略语

论文一 肾癌中KISS1基因韵表达及其对肾癌Caki-1细胞侵袭能力的影响

前言

材料与方法

实验结果

讨论

结论

论文二 KISS1基因在肾癌中表达下调机制的研究

前言

材料与方法

实验结果

讨论

结论

本研究创新性的自我评价

参考文献

综述

在学期间科研成绩

致谢

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