FSP-1/S100A4和E-cadherin在胃癌及其癌前病变中的表达与临床病理意义

摘要

目的：
　　 上皮间质转化(epithelial mesenchymal transition，EMT)在恶性肿瘤的发生、侵袭及转移过程中起着关键作用。研究显示，上皮型钙黏蛋白(E-cadherin，E-cad)的降低或缺失、成纤维细胞特异蛋白-1(fibroblast-specific protein1，FSP-1/S100A4)的过表达均是上皮来源肿瘤细胞发生EMT的生物标志。目前胃癌中有关EMT的研究尚少。本研究采用免疫组织化学方法，检测E-cadherin与FSP-1/S100A4在胃癌及其癌前病变中的表达，并分析两者与胃癌临床病理因素的关系及EMT与胃癌的关系。
　　 材料与方法：
　　 临床病理资料和组织芯片的构建:收集中国医科大学附属第一医院肿瘤外科手术切除胃癌标本295例，同时收集配对正常胃粘膜139例，肠上皮化生(IM)79例，异型增生(Dys)16例。标本离体后尽快取材，10％中性福尔马林固定24h，取材(组织厚4mm)，制作常规石蜡包埋组织块，行4μm组织切片、HE染色，用于目标组织定位。采用组织芯片制作仪将胃癌及其癌前病变、配对正常胃粘膜等目标组织构建于组织芯片蜡块中，行4μm连续切片，备用。
　　 免疫组化染色与结果判定:免疫组化两步法检测E-cadherin及FSP-1/S100A4的表达情况。鼠抗人E-adherin单克隆抗体、兔抗人FSP-1/S100A4多克隆抗体、PV9000试剂盒和氨基联苯胺(DAB)显色试剂盒均购自北京中杉生物公司。采用柠檬酸修复液(pH6.0)高压修复抗原135s，PBS替代一抗做阴性对照。结果判定:E-cadherin、 FSP-1/S100A4免疫组化染色采用DAB显色系统显色。E-cadherin特异性免疫反应为棕黄色颗粒定位于细胞膜，FSP-1/S100A4特异性免疫反应为棕黄色颗粒定位于细胞浆。免疫组化结果由两位观察者采用盲法每个病例随机选择2个高倍视野，计数200个细胞。E-cadherin免疫组化染色结果依据胞膜完整着色细胞的比例判定，＜90％为异常表达，≥90％为正常表达。FSP-1/S100A4免疫组化染色结果依据细胞染色强度(A)和阳性细胞的比例(B)两者乘积来判定。即:(A):染色强度按下列标准评定记分:0分为无色;1分为浅黄色;2分为棕黄色;3分为棕褐色;(B):阳性细胞比例按下列标准评定记分:0分为阳性细胞＜5％，1分为阳性细胞占5～10％，2分为阳性细胞占11％～50％，3分为阳性细胞51％～75％，4分为阳性细胞＞75％。两种评分相乘(A×B)，将结果分为:0分为阴性(-);1～4分为弱阳性(+);5～8分为中度阳性(++);9～12分为强阳性（+++）。
　　 结果：
　　 E-cadherin在正常胃粘膜、肠上皮化生和异型增生中90％以上上皮细胞E-cadherin呈完整胞膜着色。胃癌中E-cadherin的异常表达率为42.03％(124/295)，绝大多数癌细胞E-cadherin呈不连续胞膜着色或胞浆着色，胃癌中E-cadherin的异常表达率为42.03％，(124/295)。胃癌中E-cadherin的异常表达率在弥漫型胃癌组(48.13，77/160)显著高于肠型胃癌组(33.93％，38/112)，P＜0.05。E-cadherin的异常表达与性别、年龄、Borrmann分型、WHO组织学分型、浸润深度及淋巴结转移均无显著相关性，均P＞0.05。胃癌中FSP-1/S100A4的阳性表达率(33.22％，98/295)显著高于正常胃粘膜(0，0/139)、肠上皮化生(2.53％，2/79)和异型增生(0，0/16)，P＜0.05。正常胃粘膜、肠上皮化生和异型增生中FSP-1/S100A4的阳性表达率差异无统计学意义，均P＞0.05。胃癌中FSP-1/S100A4的表达率在弥漫型胃癌组(40.00％，64/160)显著高于肠型胃癌组(24.11％，27/112)，P＜0.05，在浸润深度达浆膜及透浆膜组(36.89％，90/244)显著高于未侵及浆膜组(15.69％，8/51)，P＜0.05。FSP-1/S100A4的表达率与性别、年龄、Borrmann分型、WHO组织学分型及淋巴结转移均无显著相关性，均P＞0.05。胃癌中FSP-1/S100A4的表达率在E-cadherin异常表达组(37.10％，46/124)高于正常表达组(30.41％，52/171)，但差异无统计学意义，P＞0.05。
　　 结论：
　　 与正常胃粘膜相比，E-cadherin在胃癌中出现较高比率的异常表达，且胃癌中E-cadherin的异常表达与Lauren分型相关。胃癌组织中FSP-1/S100A4的阳性表达率显著高于正常胃粘膜，且胃癌FSP-1/S100A4的阳性表达与胃癌的Lauren分型、浸润深度相关。本研究结果提示，胃癌组织细胞中存在着EMT，且低分化、高侵袭能力的胃癌组织中EMT程度高。

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