1-甲基-4-苯基-吡啶离子(MPP+)对PC12细胞生存率和突触蛋白-Ⅰ表达的影响

摘要

目的：本研究主要观察一定浓度的1-甲基-4-苯基-吡啶离子(MPP+)作用于PC12细胞后，随着时间的推移，它对PC12细胞的生存和凋亡的影响，观察PC12细胞的一种突触蛋白即突触蛋白-Ⅰ（synapsinⅠ）表达的变化。本研究旨在建立与帕金森病相关的细胞凋亡模型，为帕金森病的进一步研究提供基础实验依据。
　　 方法：
　　 1、PC12细胞培养和传代:将PC12细胞培养在玻璃培养瓶中，加入DMEM培养基，置于50mL/L CO2孵箱37℃湿化培养，每2天换液一次，当细胞铺满85％-90％瓶底时，0.25％胰酶消化，按1∶3传代，备用。
　　 2、实验分组:将PC12细胞分别培养在96孔、6孔培养板中，继续培养以备实验。将PC12细胞随机分为6组:A-E组:即MPP+(0h)组～MPP+(96h)组:每孔加入0.3mmol/LMPP+，分别孵0h，24h，48h，72h，96h，每个时间点设6个孔;F组:即对照组:每孔加入等剂量PBS溶液，设6个孔。
　　 3、观察各项指标:(1)用MTT（噻唑蓝）法检测PC12细胞生存率。(2)用免疫荧光染色检测PC12细胞的突触蛋白-Ⅰ的表达。
　　 4、数据处理与分析:应用MetaMorph/DP10/BX41显微图像分析系统分析免疫荧光强度A（吸收度），使用SPSS16.0统计分析软件进行单因素方差分析，所有计量资料用x±s表示，P＜0.05为差异有显著性统计学意义。
　　 结果：
　　 1、MPP+对PC12细胞具有明显的抑制作用。对照组细胞接种以后随着时间的延长，吸光度值明显增加，细胞迅速生长，细胞数量明显高于给药组。MPP+组:细胞生存率呈时间依赖性下降，尤以72h下降最明显。
　　 2、对照组，PC12细胞突触蛋白-Ⅰ表达阳性，免疫荧光强度值较高;MPP+组，随着时间的延长，突触蛋白-Ⅰ免疫荧光强度值呈时间依赖性逐渐下降，差异明显，有统计学意义(P＜0.05)。
　　 结论：
　　 1、MPP+对PC12细胞具有明显的抑制作用，它作用于PC12细胞后，可引起PC12细胞的细胞生存率呈时间依赖性下降，尤以72h下降最明显。我们可用此药诱导PC12细胞，建立与帕金森病相关的细胞凋亡模型。
　　 2、MPP+可以引起PC12细胞的突触蛋白-Ⅰ表达减少，MPP+可以使PC12细胞突触囊泡转运能力下降，神经递质释放受到抑制，突触前膜胞吞/胞吐过程受阻，损伤突触的形成，导致神经细胞间信息的传递、加工和储存出现障碍。

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