MDC1调控雌激素受体ERα介导的基因转录并抑制乳腺癌增殖与侵袭

摘要

目的:
　　乳腺癌是女性高发的恶性肿瘤之一，其发病率在世界范围内呈较快增长趋势，且发病年龄趋向年轻化[1]。尽管临床研究已经取得了较大的进步，但是其复发及转移率仍然很高。然而，乳腺癌的病因和发生发展的分子机制尚未完全清楚，弄清病因和发生发展的分子机制是目前迫切需要解决的问题，对其进行更加广泛和深入的研究有助于提高乳腺癌的诊断和治疗的成功率。
　　雌激素受体ERα是核受体超家族成员之一，是一种配体依赖性活化的转录因子[6]。研究证实正常乳腺上皮细胞内ERα很少高表达，而在大约60％-80％的乳腺癌中ERα呈现高表达，而且ERα相关信号通路在乳腺癌的发生发展过程中发挥基础性作用[2-3]。许多ERα辅转录调节因子被鉴定参与乳腺癌的进展。MDC1（也称为NFBD1）在DNA发生损伤时可通过募集DNA损伤修复相关蛋白参与调节DNA损伤后修复。MDC1基因缺陷小鼠会引起细胞染色体稳定性降低，免疫缺陷，DNA修复缺陷等现象[30]。我们前期的研究表明MDC1参与调控雄激素受体AR介导的基因转录并在前列腺癌中发挥抑癌作用，据此我们推测MDC1很可能与结构相似并同属于核受体家族的ERα相互作用，进而影响乳腺癌的发生发展。
　　在本研究中，我们的目标是明确MDC1是否参与调节雌激素受体ERα介导的基因转录以及MDC1是否影响乳腺癌的增殖和/或迁移，并试图探索相关分子机制，为乳腺癌治疗方法提供新的治疗靶点及新思路。
　　方法:
　　一、MDC1在正常乳腺组织及乳腺癌组织中的表达方式
　　1、Western Blot实验检测MDC1在乳腺癌癌旁组织及乳腺癌组织中表达水平。
　　二、ERα与MDC1在体内外相互作用的验证
　　1、应用免疫共沉淀（Co-IP）实验确定ERα与MDC1在细胞内的相互作用。
　　2、应用共焦激光扫描显微镜观察ERα与MDC1的定位及共定位。
　　三、MDC1调节ERα介导的基因转录
　　1、应用双报告基因检测系统(Dual-Luciferase Assay System)检测MDC1对ERα介导基因转录的调节。
　　2、干扰MDC1表达检测MDC1对乳腺癌细胞内的内源ERα靶基因mRNA表达的影响。
　　四、MDC1调节乳腺癌细胞的增殖和迁移
　　1、构建MDC1稳定敲低乳腺癌细胞系。
　　2、应用细胞克隆形成实验检测MDC1对乳腺癌细胞增殖的影响。
　　3、应用流式细胞术检测MDC1对乳腺癌细胞周期的影响。
　　4、荷瘤小鼠检测MDC1是否在体内影响乳腺癌细胞成瘤及肿瘤生长。
　　5、Transwell实验检测MDC1对乳腺癌细胞迁移的影响。
　　结果:
　　一、MDC1在乳腺癌组织中的表达情况
　　1、Western Blot实验证实MDC1在乳腺癌组织表达量低于癌旁正常组织
　　二、ERα与MDC1在体内外相互作用的验证
　　1、ERα与MDC1在细胞内的相互作用。
　　2、在E2存在情况下ERα与MDC1存在共定位。
　　三、MDC1调节ERα介导基因转录
　　1、在E2存在的情况下MDC1上调ERα介导的基因转录
　　2.干扰MDC1表达下调乳腺癌细胞内的内源ERα靶基因mRNA表达水平。
　　四、MDC1调节乳腺癌细胞的增殖和迁移
　　1、成功构建MDC1稳定敲低乳腺癌细胞系。
　　2、细胞克隆形成实验证实敲低MDC1促进乳腺癌细胞增殖。
　　3、流式细胞术证实敲低MDC1明显增强乳腺癌S期及G2/M期细胞。
　　4、荷瘤小鼠检测证实敲低MDC1促进乳腺癌细胞在体内成瘤及肿瘤生长。
　　5、Transwell实验证实敲低MDC1促进乳腺癌细胞迁移和侵袭。
　　结论:
　　1、MDC1在乳腺癌组织表达量低于正常乳腺组织。
　　2、MDC1与ERα在细胞中存在相互作用并增强ERα介导的基因转录。
　　3、MDC1抑制乳腺癌细胞增殖和侵袭。

目录

声明

摘要

英文缩略语

论文一 MDC1调控雌激素受体ERα介导的基因转录并抑制乳腺癌增殖与侵袭

前言

材料和方法

实验结果

讨论

结论

参考文献

论文二 ARAP3对AR介导的转录调控和前列腺癌的影响及其机制研究

前言

材料和方法

实验结果

讨论

结论

本研究创新性的自我评价

参考文献

综述 蛋白质磷酸化影响基因转录调控机制研究进展

致谢

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