siRNA法下调PRL-3对脑胶质瘤细胞SHG-44生长周期的影响

摘要

目的
　　通过siRNA法下调PRL-3研究其对在脑胶质瘤细胞SHG-44生长周期的影响。
　　脑胶质瘤是颅内常见的恶性肿瘤，来源于星型细胞或少突胶质细胞，是发生于神经外胚层的肿瘤.无论是低级别胶质瘤还是高级别胶质瘤，其生长方式均为浸润性生长，手术无法彻底清除，需要结合放疗、化疗、生物治疗等综合手段来延长病人生存期。胶质瘤总的治疗效果尚不佳。为此，需要更多筛选靶向药物，以找到能特异性针对胶质瘤组织，而不影响正常组织，既能杀死胶质瘤细胞，也能杀灭“肿瘤干细胞”;既能进入肿瘤组织内部，又无免疫逃避障碍。另外。生产工艺简单、价格低廉和易于保存及运输等也需要考虑的因素。多通路靶向治疗药物的联合应用将成为未来治疗胶质瘤的发展方向[1-7]。
　　基因治疗是生物治疗的一种，其中小RNA干扰是其重要组成部分。RNA干扰的优越性包括普遍性、高效性、特异性。大量的细胞培养和动物模型实验证实RNA干扰的机制存在于不同物种的细胞中，siRNA可在多种器官的细胞中，包括神经系统，抑制特异基因的表达，并且从理论上而言几乎所有的基因都能通过RNA干扰而被沉默，RNA抑制目标基因表达的效能非常高[8-11]。
　　PRL-3蛋白酪氨酸磷酸酶家族成员。同一家族的3名成员PRL-1，PRL-2，PRL-3在基因序列和氨基酸序列上具有高度的同源性，提示它们在功能上具有类型和功能的互补性。PRL-3在肿瘤中的作用最先从消化道肿瘤开始，研究发现结肠癌的肝转移灶中PRL-3出现高表达，还有在胃癌中也出现了PRL-3的高表达[12-15]。
　　有文献报道[16]，其PRL-3通过脱磷酸及其COOH末端定位于细胞质膜等一系列的作用，发挥促进肿瘤细胞增殖、侵袭及肿瘤血管生成的作用。已有研究证实证明脑胶质瘤中PRL-3高表达，它能促进胶质瘤的增值和侵袭，我们通过siRNA干涉的方式下调脑胶质瘤细胞SHG-44中PRL-3表达，同时我们的实验要证明PRL-3表达的下调能够对SHG-44细胞增殖产生抑制作用，对其凋亡产生促进作用。PRL-3在脑胶质瘤中发挥着重要的作用，目前PRL-3已经成为肿瘤靶向治疗的重要分子，随着研究的深入，其很可能成为脑胶质瘤治疗的新的靶点，为脑胶质瘤的治疗提供新的选择。
　　方法
　　采用siRNA干涉的方法下调脑胶质细胞瘤细胞SHG-44中PRL-3表达水平，通过westernblot方法检测干涉效果，绘制细胞生长曲线、流式细胞仪检测细胞周期及凋亡以观察下调PRL-3对脑胶质瘤细胞株SHG-44细胞的影响。
　　结果
　　Westernblot提示siRNA能够下调PRL-3在脑胶质瘤细胞株SHG-44细胞中的表达，细胞生长曲线显示下调PRL-3能够抑制细胞的增殖，流式细胞仪检测发现下调PRL-3的表达可以促进脑胶质瘤细胞株SHG-44细胞G1期阻滞，S期减少，凋亡增加。
　　结论
　　下调PRL-3能够明显抑制脑胶质瘤细胞株SHG-44细胞的增殖，PRL-3很可能成为脑胶质瘤基因治疗的新靶点。

目录

声明

摘要

英文缩略语

前言

实验材料与方法

实验结果

讨论

结论

本实验创新性自我评价

参考文献

综述 抑制细胞增殖在治疗脑胶质瘤中的意义

在学期间科研成绩

致谢

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