蛋白酶体抑制剂增强TRAIL介导骨肉瘤细胞凋亡及抑制侵袭的研究

摘要

目的：
　　骨肉瘤是严重危害青少年健康的最常见恶性骨肿瘤，易早期肺转移，预后极差。目前采用的保肢性手术联合新辅助化疗，可显著提高患者术后生存率，治疗效果优于以往的截肢性手术，且因保留了肢体，使病人的生存质量显著提高。但大量临床实践证明，大剂量联合化疗后骨肉瘤病人常产生耐药性，使原本较为有效的化疗药物迅速失去对肿瘤组织的杀伤作用，从而导致瘤体复发或转移。并且化疗周期的进程将产生较为严重的对肝肾功能及各系统的毒副作用，许多病人甚至死因并非是骨肉瘤疾病本身，而是化疗药带来的多系统功能损害。泛素-蛋白酶体系统是细胞内蛋白质降解的主要途径，参与细胞内80％以上蛋白质的降解。近来应用蛋白酶体抑制剂改变其酶切位点活性已成为抗肿瘤治疗的研究热点。本实验通过应用蛋白酶体抑制剂来探讨克服骨肉瘤细胞对TRAIL耐药的机制，从而增强TRAIL对骨肉瘤细胞的杀伤作用。
　　方法：
　　常规培养和传代人骨肉瘤细胞系OS732细胞，取对数生长期的细胞，加入不同浓度的蛋白酶体抑制剂MG132，MTT法检测细胞增殖。实验分为四组:对照组:细胞正常培养不加处理因素;TRAIL组:终浓度为1ng/ml，10ng/ml，100ng/ml;MG132组:0.1μM，1μM，10μM，联合组:100ng/mlTRAIL和10μMMG132。培养24小时后，AnnexinV-FITC/PI流式检测OS732细胞凋亡，流式细胞技术检测各组细胞周期情况，提取细胞总蛋白，Westernblot检测Caspase通路中Caspase-3，8的表达水平，免疫荧光观察细胞凋亡。采用SPSS19.0统计学软件进行统计学分析。数据采用(x)±s表示，多组间差异显著性选用单因素方差分析多组间比较，组间比较选用SNK方法，P＜0.05表明具有统计学意义。
　　结果：
　　不同浓度的TRAIL作用于OS732细胞后，细胞未出现明显的凋亡增加现象。不同浓度的MG132作用于OS732细胞后，细胞出现凋亡增加，但作用不是很明显。我们发现联合TRAIL和MG132以后，与对照组及单独应用组相比，凋亡率明显增加，在应用Caspase相关抑制剂以后，上述现象消失。细胞周期显示细胞被阻滞在G2-M期。联合组骨肉瘤OS732的迁移能力受到明显抑制。Caspase通路中的Caspase3，8的表达明显增加，DR5及P27kip1的表达也明显升高，而MMP-9的表达降低。
　　结论：
　　MG132联合TRAIL能显著杀伤骨肉瘤OS732细胞，显著抑制骨肉瘤OS732细胞的侵袭转移能力。激活Caspase通路，使Caspase3，8的表达显著升高，从而导致骨肉瘤细胞凋亡。

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摘要

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材料和方法

结果

讨论

结论

本研究创新性及自我评价

参考文献

综述 骨肉瘤的研究及治疗进展

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