CD81、CLDN1基因多态性与丙型肝炎病毒感染易感性的相关性研究

摘要

目的：
　　丙型肝炎病毒(hepatitisC virus，HCV)可引起急、慢性病毒性肝炎，可发展成肝硬化、肝细胞癌、乃至肝衰竭。我国约有3700～4000万人感染HCV，且报告发病人数呈逐年升高。目前，国内外推荐的抗病毒治疗方案为聚乙二醇化干扰素结合利巴韦林的联合治疗，但仍有近半数的患者未能达到持续病毒学应答(SVR)，宿主遗传因素对于丙型肝炎的易感性、临床表现及转归起到关键性的作用。其中CLDN1与CD81可相互作用，组成CD81-CLDN1受体复合物，此复合受体在HCV入侵肝细胞中起关键作用。有研究表明CD81、CLDN1的SNP变异能够影响机体某些免疫功能，而CD81、CLDN1这些基因序列的改变是否与丙型肝炎感染有关，本研究采用病例一对照方法对这一问题进行探讨。
　　方法：
　　1、研究对象
　　本研究采用病例对照研究方法，选取922例在2013年11月至2014年12月期间到中国医科大学附属第一医院就诊或体检者为研究对象，其中病例组包括461例慢性丙型肝炎患者，对照组包括461例没有丙肝病史的健康体检者。慢性丙型肝炎患者的抗HCV抗体阳性且在随访期间均可检测到一定量的血清HCV RNA。对照组与病例组研究对象基于年龄、性别、民族和居住地区等因素进行匹配。
　　2、基因组DNA的提取
　　采用QIAamp⑩DNA Micro Kit(QIAGEN)从200μl全血样本中提取基因组DNA，具体操作步骤参照其说明书进行。
　　3、CD81、CLDN1基因SNP检测
　　采用HRM-PCR结合混样法对研究对象CD81 rs708564和CLDN1rs893051基因SNP进行检测，并应用LightCycler@480基因扫描软件进行结果分析。
　　4、测序验证
　　随机抽取50份PCR产物样本进行直接测序，以验证HPM-PCR结果的准确性。
　　5、统计学分析
　　应用SPSS18.0统计软件进行所有的统计学分析。对照组数据进行Hardy-Weinberg平衡检验，对照与病例组组间基因型分布差异采用X2检验分析。丙型肝炎感染易感性与单基因多态性间的相关性用非条件Logistic回归模型分析。所有的P值都是双侧概率，P＜0.05具有统计学差异。
　　结果：
　　1、研究对象基本特征
　　通过研究设计，对照与病例组组间年龄、性别无统计学意义。此外，两组间的脂质分布均无统计学差异(P＞0.05)。同样，比较两组间脂质分布的平均水平时，也未检测到任何相关性。
　　2、将对照组人群的基因型频率进行了遗传平衡检验，X2检验结果显示符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律。
　　3、CD81rs708564和CLDN1 rs893051与HCV感染易感性的关系
　　病例组的CD81 rs708564 CC、CT和TT基因型分布频率分别是18.2，55.3和26.5％，而对照组的基因型频率分别是14.8，52.7和32.5％。比较病例与对照组的TT/CC和TT/CC+CT的基因型分布与HCV感染的相关性强度分别为0.66(95％ CI:0.44-0.98，P=0.04)和0.75(95％ CI:0.56-0.99，P=0.04)，两组间基因型分布频率有显著的统计学意义。此外，与C等位基因相比较，T等位基因与HCV感染的相关性强度为0.82(95％ CI=0.68-0.99，P=0.04)。病例组的CLDN1rs893051 GG、GC和CC的基因型分布平率分别是63.1，33.2和3.7％，对照组的基因型分布频率61.2，34.3和3.9％。GC/GG和CC/GG的基因型分布对HCV感染风险无影响，其相关性强度分别为0.95(95％ CI:0.72-1.25)和0.93(95％ CI:0.47-1.83)。
　　4、CD81 rs708564和CLDN1 rs893051对HCV感染的联合作用携带有CLDN1 GG纯合体的HCV病例组的CD81 TT与CD81 CC相比，其基因型频率显著低于对照组(分别为24.7％和34.0％，P＜0.05)。CLDN1 GG和CD81 TT同时出现与HCV感染的相关性强度为0.59(95％ CI=0.36-0.97)。
　　5、血清HDL-C、LDL-C水平对CD81 rs708564和CLDN1 rs893051与HCV感染易感性的影响
　　在低血清HDL-C和高LDL-C组，CD81 rs708564 TT纯合体和T等位基因频率与HCV感染的相关性强度分别为0.82(95％ CI:0.67-1.00，P=0.05)和0.43(95％ CI:0.22-0.86，P=0.00)。而在高血清HDL-C组，CLDN1 rs893051 G/C杂合体频率与HCV感染的相关性强度为0.40(95％ CI:0.18-0.86，P=0.02)。此外，在高血清HDL-C组，病例组CLDN1 C等位基因分布频率显著高于对照组。
　　结论：
　　1、CD81 rs708564和CLDN1 rs893051 SNP位点可能影响中国汉族人群对HCV感染的易感性。
　　2、CD81 TT基因型能够显著减低HCV感染的易感性。
　　3、CLDN1 GG基因型对HCV感染易感性无影响，但当CLDN1 GG基因型与CD81 TT基因型同时出现时能够降低HCV感染易感性。
　　4、在低血清HDL-C和高血清LDL-C的个体中，CD81 rs708564TT基因型更以降低HCV感染易感性。在高血清HDL-C的个体中，CLDN1 rs893051 G/C基因型同样可以降低HCV感染风险。

目录

声明

摘要

英文缩略语

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实验方法

结果

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本研究创新性的自我评价

参考文献

综述 CD81-CLDN1基因多态性与丙型肝炎相关性的研究进展

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