蛋白质PRDX1和ETFB在输尿管部分梗阻导致肾积水患儿尿液中表达的研究

摘要

目的:
　　通过检测蛋白质PRDX1和ETFB在输尿管部分梗阻导致肾积水患儿尿液中的表达量，探讨在先天性肾积水患儿尿液中PRDX1和ETFB作为新的特异性标记物的可行性。
　　实验材料与方法:
　　1.标本来源
　　实验组一（肾积水手术组）标本来自于2013年3月-2016年5月就诊于中国医科大学附属盛京医院小儿泌尿外科病房并行泌尿外科手术治疗的20例肾盂输尿管部分梗阻(PUJO)导致单侧肾积水患者，这些患者术前均行静脉肾盂造影(IVP)、肾脏核素扫描(ECT)及延迟增强三维重建CT检查，并经手术再次证实患病原因为PUJO所致的单侧先天性肾积水。肾积水手术组患儿年龄分布在1月-12月(2.75±2.53月)之间，男性14例，女性6例;左侧14例，右侧6例。完整收集20例单侧先天性肾积水患儿术前、术后4天及术后1个月的膀胱内尿液（晨起清洁中段尿液），其中7例留取术中患肾肾盂内尿液。实验组二（肾积水保守观察组）标本来自于2015年1月-2016年4月就诊于中国医科大学附属盛京医院小儿泌尿外科门诊的9例单侧先天性肾积水患者，年龄1.5月-8月（4.39±2.62月），男性7例，女性2例，左侧7例，右侧2例。对照组（无肾积水患儿）标本来自于中国医科大学附属盛京医院小儿外科，在2015年1月-2016年5月就诊并经手术治疗的13例腹股沟斜疝或血管瘤患儿。患儿年龄分布在1月-6月（3.08±1.80月）之间，男性6例，女性7例。分别收集肾积水保守观察组患儿和无肾积水患儿膀胱内晨起中段清洁尿液。所有新鲜离体尿液量要求均约15ml，并于60分钟内置于-80℃冰箱贮存备用。患儿尿液收集均经家属知情同意，并经伦理道德委员会批准。
　　2.实验方法（一）利用酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定实验组一（肾积水手术组）、实验组二（肾积水保守观察组）及对照组（无肾积水患儿）尿液样本中新的特异性生物学标记物PRDX1和ETFB的浓度。（二）ECT检测手术组肾积水和保守观察组肾积水的分肾功能。
　　3.统计学分析采用SPSS21.0统计软件进行数据整理分析，定量资料用均值±标准差来表示，偏态分布的数据资料采用非参数Kruskal-Wallis H检验，组间两两比较采用Bonferroni法，检验水准为α=0.05。皮尔森相关系数进行变量之间的相关性评估，并做受试者操作ROC特征曲线分析。
　　ELISA检测结果:
　　蛋白质PRDX1在肾积水手术组、保守观察组及无肾积水患儿尿液中表达情况汇总:20例手术组肾积水患儿术前膀胱内尿液浓度为13.44±1.85ng/ml，术后4天膀胱内尿液为8.91±0.89 ng/ml，术后1个月膀胱内尿液为6.61±1.78 ng/ml。9例保守观察组肾积水患儿膀胱内尿液为6.05±0.91 ng/ml，无肾积水患儿膀胱内尿液为3.90±1.13ng/ml。其中手术组肾积水收集7例患儿术中患侧肾盂内尿液，并测定尿液浓度为12.84±2.20 ng/ml。蛋白质PRDX1在肾积水手术组患儿术前膀胱内尿液中的表达量明显高于手术后4天和手术后1个月膀胱内尿液中的表达量，并且差异有统计学意义(P＜0.01);蛋白质PRDX1在手术后4天膀胱内尿液中的表达量高于手术后1个月膀胱内尿液中的表达量，差异有统计学意义(P＜0.01)。蛋白质PRDX1在肾积水手术组患儿术前膀胱内尿液中的表达量明显高于对照组和肾积水保守观察组患儿膀胱内尿液中的表达量，并且差异有统计学意义(P＜0.01)。蛋白质PRDX1在保守观察组肾积水中高于对照组中患儿膀胱内尿液中的表达量，差异有统计学意义(P＜0.01)。
　　蛋白质ETFB在肾积水手术组、保守观察组及无肾积水患儿尿液中表达情况汇总:20例手术组肾积水患儿膀胱内尿液为8.25±1.23ng/ml，术后4天膀胱内尿液为5.59±0.98ng/ml，术后1个月膀胱内尿液为4.24±0.73 ng/ml。9例保守观察组肾积水患儿膀胱内尿液为3.75±0.78ng/ml，无肾积水患儿膀胱内尿液为2.52±0.79ng/ml。其中手术组肾积水收集7例患儿术中患侧肾盂内尿液，并测定尿液浓度为8.20±2.00ng/ml。尿液蛋白质ETFB在手术组肾积水患儿术前膀胱内尿液中的表达量明显高于术后4天和术后1个月膀胱内尿液中的表达量，并且差异有统计学意义(P＜0.01);蛋白质ETFB在术后4天膀胱内尿液中的表达量高于术后1个月膀胱内尿液中的表达量，并且差异有统计学意义(P＜0.01)。蛋白质ETFB在手术组肾积水患儿术前膀胱内尿液中的表达量明显高于对照组和保守观察组肾积水患儿膀胱内尿液中的表达量，并且差异有统计学意义(P＜0.01)。蛋白质ETFB在保守观察组肾积水中高于对照组中患儿膀胱内尿液中的表达量，差异有统计学意义(P＜0.05)。
　　实验组一（手术组肾积水）患儿年龄为2.75±2.53个月，实验组二（保守观察组肾积水）患儿年龄为4.39±2.62个月，无肾积水患儿年龄为3.08±1.80个月，各组差异均无统计学意义(P＞0.05)。此外，三组患儿之间性别经卡方检验差异也均无统计学意义。
　　相关性分析结果:
　　蛋白质PRDX1在手术组肾积水患儿术前膀胱内尿液中的表达量与患侧肾脏的分肾功能呈负相关性（r=-0.724，P＜0.01）。蛋白质PRDX1在手术组肾积水患儿术前膀胱内尿液中的表达量与术中患侧肾脏肾盂内尿液中的表达量呈正相关性(r=0.897，P＜0.01)。当PRDX1≥7.338ng/ml时，患侧肾脏的分肾功能降至40％以下，受试者操作(ROC)特征曲线下面积0.808，诊断灵敏度94.7％，特异度70％。蛋白质ETFB在患儿术前膀胱内尿液中的表达量与患侧肾脏的分肾功能呈负相关性(r=-0.777，P＜0.01)。蛋白质ETFB在手术组肾积水患儿术前膀胱内尿液中的表达量与术中患侧肾脏肾盂内尿液中的表达量呈正相关性(r=0.976，P＜0.01)。当ETFB≥5.615ng/ml时，患侧肾脏的分肾功能降至40％以下，受试者操作(ROC)特征曲线下面积0.811，诊断灵敏度89.5％，特异度70％。
　　结论:
　　在肾盂输尿管连接处梗阻导致肾积水患儿中尿液蛋白质PRDX1和ETFB表达量明显上调，手术组肾积水患儿尿液中PRDX1和ETFB蛋白表达量与保守观察组肾积水患儿相比明显上调。术后1个月手术组肾积水患儿尿液中PRDX1和ETFB蛋白表达与术前相比明显下降。肾积水患儿膀胱尿液PRDX1和ETFB蛋白的表达量与患侧肾脏分肾功能呈负相关性。尿液蛋白质PRDX1和ETFB有可能成为PUJO所致先天性肾积水早期诊断及手术干预的特异性生物标记物。

目录

声明

摘要

英文缩略语

1 前言

2．1 、标本来源

2．2 实验材料

2．2．1 主要试剂与试剂盒

2．2．2 主要仪器与设备

2．3 实验方法

2．3．2 ETFB试剂盒的ELlSA检测

2．4 统计学分析

3 结果

3．1 人口学资料、临床、实验室和影像学资料整理分析

3．2 ELISA检测尿液中PRDX1、ETFB的表达情况

3．3 相关性分析结果

3．4 接受者操作曲线分析

4 讨论

5 结论

本研究创新性的自我评价

参考文献

综述一 差异蛋白质在梗阻性肾病中的研究进展

综述二 线粒体功能障碍在梗阻性肾病进展中的作用

致谢

个人简历