HpSlyD调控TCTP促进CDX2和VIL1表达诱导胃粘膜肠化生作用的研究

摘要

目的:幽门螺杆菌是致胃肠化生(gastric intestinal metaplasia，GIM)最重要的危险因素之一。我们先前的研究表明HpslyD阳性菌株感染与GIM相关。本研究拟从体、内外不同层面探讨HpSlyD是否可以促进GIM相关因子CDX2和VIL1表达;探讨HpSlyD诱导CDX2和VIL1表达过程中TCTP的调控作用，旨在明确HpSlyD诱导GIM发生可能的信号通路。
　　研究方法:1、利用200ng/ml浓度HpSlyD作用AGS及N87细胞系，提取细胞总RNA和蛋白质。采用实时定量荧光-聚合酶链反应(Real-time PCR)以及蛋白质免疫印迹(Western blot)检测CDX2及VIL1在HpSlyD作用前后表达的变化。2、利用Western blot方法检测TCTP蛋白在上述HpSlyD作用细胞系及AGS-HpslyD-GFP稳转细胞系的表达情况;构建TCTP-siRNA，建立瞬时低表达TCTP的AGS、N87细胞系及AGS-HpslyD-GFP稳转细胞系，Western Blot检测在TCTP低表达前后CDX2和VIL1的表达情况;同时，构建TCTP过表达质粒（pCMV6-AC-GFP），建立瞬时高表达TCTP的AGS和N87细胞系，Weatern Blot检测在TCTP高表达前后CDX2和VIL1的表达情况。3、利用HpSlyD抑制剂FK506预处理细胞系AGS、N87及AGS-HpSlyD-GFP稳转细胞系，Real-time PCR及Western blot比较预处理前后细胞CDX2，VIL1及TCTP表达的变化。4、选取胃镜活检浅表性胃炎、肠化型萎缩性胃炎以及胃癌患者胃粘膜石蜡包埋组织标本，提取石蜡包埋组织DNA，PCR方法扩增H.pylori保守基因（16s rRNA、glm M等）。在H.pylori阳性人群中，利用PCR方法扩增HpslyD基因保守区。利用免疫组化方法检测组织标本中CDX2和TCTP的表达情况。在各种疾病中，比较H.pylori阳性和H.pylori阴性组间及HpslyD阳性和HpslyD阴性组间上述指标蛋白表达的差异;在HpslyD阳性组中，比较不同疾病组间CDX2和TCTP蛋白表达的差异;同时探讨在不同H.pylori感染状态下TCTP和CDX2表达的相关性.5、统计分析采用SPSS16.0软件，体外实验均重复三次，结果用(x)±SD表示，采用两独立样本t检验，体内实验采用非参检验或者双侧卡方检验。
　　结果:1、HpSlyD能够诱导人胃上皮细胞系中CDX2和VIL1的表达;2、HpSlyD能够诱导人胃上皮细胞系TCTP的表达;3、HpSlyD诱导的CDX2和VIL1表达能够通过下调TCTP表达而被抑制;4、TCTP过表达能够上调CDX2和VIL1表达;5、HpSlyD结合蛋白FK506能够阻断HpSlyD诱导的CDX2、VIL1和TCTP表达;6、在IM-GA和GC中，HpslyD阳性菌株感染与CDX2和TCTP表达相关;7、随着胃疾病发展GS-IM-GA-GC，HpslyD阳性菌株感染促进CDX2和TCTP表达;8、HpslyD阳性菌株感染的胃疾病患者中，TCTP与CDX2表达呈正相关。
　　结论:1、HpSlyD能够促进GIM相关因子CDX2和VIL1的表达;2、HpSlyD通过调控TCTP促进CDX2和VIL1表达;3、HpslyD阳性菌株可能通过TCTP及CDX2诱导GTM及促进胃疾病的进展。

目录

声明

摘要

英文缩略语

1 前言

2 材料和方法

2．1 主要试剂耗材和仪器设备

2．2 方法

2．3 统计学分析

3 结果

3．1 HpSlyD能够诱导人胃上皮细胞系中CDX2和VIL1的表达

3．2 HpSlyD能够诱导人胃上皮细胞系TCTP的表达

3．3 HpSlyD诱导的CDX2和VIL1表达能够通过下调TCTP表达而被抑制

3．4 TCTP过表达能够上调CDX2和VIL1表达

3．5 HpSlyD结合蛋白FK506能够阻断HpSlyD诱导的CDX2、VIL1和TCTP表达

3．6 在IM-GA和GC中，HpslyD阳性菌株感染与CDX2和TCTP表达相关

3．7 HpslyD阳性菌株感染的胃疾病患者中TCTP与CDX2表达呈正相关

4 讨论

5 结论

本研究创新性自我评价

参考文献

综述 “毒力因子-先天性免疫受体’’在幽门螺杆菌宿主免疫逃逸中的作用

攻读学位期间取得的研究成果

致谢

个人简历