双位点保守基因特异性PCR-CE-RFLP快速鉴定病原菌

摘要

原核生物的rRNA基因位点(rnn)具有高度的保守性,同时不同菌属细菌之间又存在相对稳定的变异性,因此广泛被用于细菌的种系发生学与分类学的鉴定上.其中16SrRNA和16S-23S rRNA间区是最常用的两个基因.为了有效利用上述两上基因,并且克服方法学上的不足,我们筛选了上述两个基因的合适引物,分别用用FAM和JOE两种荧光素标记,并且将模板制备过程加以简化,即直接在99℃条件下裂解10分钟,避免了长时间的DNA提取的复杂操作,适当调整了PCR反应条件,不仅让两种引物能同时在同一条件下反应,而且使得16S-23SrRNA 间区基因的次级产物量尽可能减少.经过对三株标准(ATCC)菌株和两株阴性对照真菌的DNA PCR扩增比较后,发现效果很好.该实验共检测革兰阴性、阳性病原菌183株,分属5个属19个种.经过分析后发现,针对16SrRNA基因的RFLP谱数据仅仅能将细菌鉴定到

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前言

材料和方法

实验结果

讨论

结论

致谢

参考文献

文献综述

参考文献