雪旺细胞体外分离培养及与支架材料的生物相容性研究

摘要

周围神经缺损比较常见，临床上应用最广的解决方式是自体神经移植。自体神经移植是临床上治疗周围神经缺损的“金标准”，但自体神经移植存在着很大的缺陷，如供区感觉障碍、自体神经来源有限及遗留手术疤痕等问题，对于较长的或粗大的神经缺损，自体神经移植难以满足需要。随着周围神经组织工程的兴起，自体神经来源不足的问题可望解决。 目的： 1.采用SD大鼠的雪旺细胞(SC)作为周围神经组织工程的种子细胞，在体外分离培养，探索体外培养及增殖雪旺细胞的方法。 2.选取生长状况和纯度较好的第三代细胞，将经组织酶消化下来的细胞移植到单纯壳聚糖和复合FK506壳聚糖两种支架材料上，与第四代单纯细胞培养作为对照，观察雪旺细胞与支架材料的生物相容性。 方法： 1.取SD大鼠双侧的坐骨神经，预变性后，剪碎至1mm<'3>大小的组织块，单酶消化法进行分离培养，Geneticin液抑制成纤维细胞生长，低浓度酶快速消化传代进一步纯化雪旺细胞，用光镜进行形态学观察、S-100蛋白进行鉴定。 2.取生长状况较好的第三代细胞，经组织酶消化下来的细胞移植到上述两种支架材料上，对照组继续传代培养以作对照，用MTT法(四甲基偶唑盐微量酶反应比色法)比较不同支架上细胞的生长活力，光镜观察细胞形态和S-100蛋白免疫鉴定细胞纯度。 结果： 1、通过上述方法分离培养获得了经S-100蛋白鉴定纯度为85﹪的第三代雪旺细胞，细胞数量为2.764×10<'7>/ml，细胞形态多数为梭形。 2、雪旺细胞在复合FK506壳聚糖组纯度为93﹪，单纯壳聚糖组纯度为89﹪，第四代单纯培养组纯度为76﹪。 3、单纯第四代雪旺细胞形态大部分呈梭形，少部分为三角形，细胞活力一般，细胞OT值为0．1293，细胞排列不规则；单纯壳聚糖培养组梭形细胞比例更大，形态更规则，细胞活力较好，细胞OT值为0.1568，细胞排列呈现栅栏状；复合FK506壳聚糖组细胞形态最规则，细胞活力最好，细胞OT值为0.1805，细胞排列成典型的漩涡状或栅栏状。 结论： 1、SD大鼠坐骨神经中分离培养雪旺细胞来源确实，取材方便，可以作为周围神经组织工程试验研究的种子细胞来源，采用单酶消化法、Geneticin液抑制成纤维细胞生长，可以获得较高纯度的雪旺细胞。 2、雪旺细胞与壳聚糖支架材料生物相容性好，FK506可促进细胞生长。

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摘要

前言

材料与方法

结果

讨论

结论

参考文献

综述 周围神经组织工程学研究进展

附图

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