锌脂蛋白A20抑制TLR4介导的人单细胞炎症反应的实验研究

摘要

目的： 应用TLR4特异性激动剂脂多糖(LPS)刺激体外培养的人单核细胞，激活TLR4/NF-κB信号途径，将含有A20基因的质粒转染入单核细胞进行干预，观察A20过表达后单核细胞膜受体TLR4表达的变化，以及对下游促炎因子TNF-α、IL-12及抗炎因子IL-10表达的调节，并进一步研究A20过表达对促炎因子/抗炎因子即TNF-α/IL-10和IL-12/IL-10比率的影响，以探讨锌脂蛋白A20对单核细胞炎症反应的保护作用及可能的调节机制。 方法： 外周血经EDTA抗凝，Ficoll细胞分离液分离外周血单个核细胞，将单核细胞贴壁培养于不含血清的RPMI-1640培养液中，调整单核细胞浓度为1×105个/ml，实验设A组(为空白对照组，培养液中不加任何干预因素)；B组(为LPS组，无血清培养48小时，在培养基中加入1mg/L的LPS作用24小时)；C组(为A20转染组，无血清培养24小时，转染pCAGGS-GFP/A20质粒阳离子脂质体复合物培养48小时)；D组(为LPS+A20转染组，无血清培养24小时，转染pCAGGS-GFP/A20质粒阳离子脂质体复合物培养48小时，于转染过程中加入1mg/L的LPS作用24小时)。胰酶消化法收集以上各组单核细胞；采用免疫荧光方法检测GFP报告基因，免疫组化检测A20蛋白的表达；提取总mRNA用RT-PCR检测内源性A20、外源性A20及TLR4的mRNA表达；应用流式细胞检测技术检测TLR4的表达，以CD14+为单核细胞标记，采用未转染的细胞进行调零，记录荧光阳性细胞的百分率：采用双抗体夹心ELISA方法检测上清液TNF-α、IL-12及IL-10表达水平。 结果： 1．单核细胞受到LPS(1mg/L)刺激后，其自身受体TLR4和内源性A20的mRNA和蛋白表达以及促炎因子TNF-α、IL-12和抗炎因子IL-10表达较对照组均明显升高；TNF-α/IL-10和IL-12/IL-10的比率均明显高

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综述 锌脂蛋白A20与动脉粥样硬化

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