体外预测已烯雌酚引起药物-药物相互作用的可能性

摘要

目的:体外实验考查己烯雌酚对五种主要细胞色素P450酶亚型活性的抑制作用，以评估己烯雌酚(DES)通过抑制这五种细胞色素P450(P450，CYP)亚型而引发药物药物相互作用的可能性。
　　 方法：混合人肝微粒体与不同浓度的DES（或阳性抑制剂）、五种主要细胞色素P450酶的探针底物在37℃条件下孵育相应的反应时间后，用高效液相色谱-紫外吸收（HPLC-UV）法观察探针底物的代谢产物的生成率，计算IC50值。进一步，选取不同的探针底物浓度（覆盖Km值）和DES浓度（覆盖IC50值）测定出相应的代谢速率，用Lineweaver-Burk作图和Dixon作图来判断可逆抑制类型，再用二次作图（Lineweaver-Burk作图中各线的斜率对DES浓度作图）来计算抑制动力学参数Ki。单点失活法用于测定DES对五种主要细胞色素P450酶是否有基于机理的抑制。结合Ki值和DES的最大血药浓度(Cmax)对体内产生的药物-药物相互作用进行预测。
　　 结果：己烯雌酚对CYP3A4，CYP2C8，CYP2C9和CYP2E1体现出浓度依赖型的抑制，相应的IC50值分别为6μmol·L-1，4.9μmol·L-1，3.6μmol·L-1和30μmol·L-1。DES对CYP3A4，CYP2C8，CYP2C9和CYP2E1抑制的Dixon作图的交点都在第二象限，而Linewever-Burk作图的交点都在纵轴上，这两方面证据共同证实DES对CYP3A4，CYP2C8，CYP2C9和CYP2E1抑制属于竞争型抑制。二次作图计算出相应的Ki值为4.4μmol·L-1(CYP3A4)和8.0μmol·L-1(CYP2C8)3.0μmol·L-1(CYP2C9)和5.0μmol·L-1(CYP2E1)。DES对CYP3A4,CYP2C8,CYP2C9,CYP1A2和CYP2E1不存在基于机理的抑制。利用DES的最大血药浓度（Cmax=18.7μmol·L-1）计算出AUC的增加值分别为4.3（CYP3A4代谢的底物）和2.3（CYP2C8代谢的底物），6.2（CYP2C9代谢的底物）和3.7（CYP2E1代谢的底物）。
　　 结论：DES对CYP3A4，CYP2C8，CYP2C9和CYP2E1的活性有较强的抑制作用，对CYP1A2几乎无抑制作用。所以在临床常用的剂量条件下，很容易诱导药物-药物相互作用。当DES与CYP3A4，CYP2C8，CYP2C9或CYP2E1主要代谢的药物联用时，潜在的药物-药物相互作用应该格外注意。