一例低纤维蛋白原血症家系基因缺陷的研究

摘要

目的:遗传性低纤维蛋白原血症(hereditary hypofibrinogenemia)是纤维蛋白原(fibrinogen，Fg)明显减少的一种遗传性疾病，由编码纤维蛋白原的基因(FGA、FGB、FGG)的杂合突变导致，突变类型包括错义、无义、剪切位点、启动子、小的插入和缺失。这些突变可以影响转录，mR.NA(messenger RNA)的加工，翻译，翻译后加工，肽的折叠，链的组装，肝细胞的分泌，成熟蛋白的稳定性。遗传性低纤维蛋白原血症是一种罕见的疾病，常发生于欧洲地区。目前已发现的、导致中国人遗传性低纤维蛋白原血症的基因突变屈指可数，如AαⅣS2+1G＞C、γAsp320Gly、γAsp316His、BβGly419Val和γThr277Arg。我们发现了1例低纤维蛋白原血症中国家系，其原因未明。故本文目的是研究此例低纤维蛋白原血症家系的基因缺陷，进一步揭示遗传性低纤维蛋白原血症的发生机制。
　　 方法:采集家系外周血，检测活化部分凝血活酶时间(activeated partial thromboplastin time，APTT)、凝血酶时间(thrombin time，TT)、凝血酶原时间(prothrombin time，PT)、D-二聚体(D-dimer)、纤维蛋白降解产物(fibrin degradation products，FDP)、抗凝血酶Ⅲ，Fg活性用凝固法进行检测。抽提外周血基因组DNA，通过设计引物，PCR法扩增Fg3个基因FGA、FGB和FGG所有外显子，PCR产物纯化，DNA直接测序法进行测序以寻找突变基因。
　　 结果:先证者及其妹妹、1个哥哥的Fg水平均明显减低，分别为0.84g/L，0.87g/L，0.61g/L。先证者及其妹妹有PT、TT延长，PT分别是15.8sec，15.5sec（正常范围11-14.5sec），TT分别是30sec，29.7sec（正常范围14-21sec），D-二聚体、FDP、抗凝血酶Ⅲ为正常范围。先证者的女儿、儿子及其外甥女Fg水平正常。先证者基因分析显示在先证者的FGA、FGB、FGG基因区发现3个纯合突变:FGAg.1674A＞T;FGAg.3271C＞T;FGGg.4931A＞T，而在家系的其它患者及正常个体中也发现此种突变。另外又发现了3个杂合突变:FGGg.7925C＞T;FGGg.8208G＞A;FGGg.7933G＞A。
　　 结论:在家系的其他患者和正常个体中都发现了这3个纯合突变，故纯合突变不是致病突变。而发现的3个杂合突变可能为致病突变，有待进一步的全基因组测序及功能试验。

目录

声明

摘要

前言

资料和方法

1．资料

1．1 材料与仪器

1．2 对象

2．方法

2．1 家系成员外周血纤维蛋白原测定

2．2 Ficoll分离外周血单个核细胞

2．3 外周血单核细胞提取基因组DNA

2．4 引物设计及合成

2．5 PCR扩增

2．6 PCR产物纯化

2．7 Fg基因测序

结果

1．实验检测结果

2．Fg基因检测结果

讨论

结论

参考文献

综述

附录

致谢