替莫唑胺和/或联合放疗治疗大鼠胶质瘤细胞株的体外研究

摘要

目的:本实验应用替莫唑胺（Temozolomide，TMZ）和/或放射处理作用于大鼠胶质瘤细胞株，观察作用前后细胞株的周期变化和O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(O6-methylguanine-DNA methyltransferase，MGMT)表达情况，初步从分子生物学水平研究TMZ化疗联合放疗对胶质瘤细胞的杀伤作用。
　　 方法:通过MTT实验测定TMZ作用24 h、48 h、72 h对大鼠胶质瘤细胞株的生长抑制率。应用克隆形成实验，测定TMZ对大鼠C6胶质瘤细胞株的放射增敏比(sensitivity enhancement ratio，SER)。应用流式细胞术检测以下4组作用前后大鼠C6胶质瘤细胞株的周期变化，应用免疫细胞化学方法检测以下4组的MGMT表达情况。将实验分为4组:空白对照组;药物组:0.2×半数抑制浓度(IC50)TMZ处理48 h;单纯照射组:6 Gy单次照射;TMZ联合放射线组:0.2×IC50TMZ处理48 h后行6 Gy单次照射。
　　 结果:
　　 1.MTT结果显示:TMZ作用于大鼠C6胶质瘤细胞株24 h后细胞抑制率无明显变化，作用48 h、72 h时细胞抑制率随TMZ浓度的升高而增加，IC50分别为913 umol/L，412 umol/L。
　　 2.克隆形成实验结果显示:与不同剂量单纯照射组相比，TMZ联合不同剂量放射线处理各组的存活分数差异有统计学意义(P＜0.05)。在TMZ浓度为182.6umol/L时，SER为1.30。
　　 3.流式细胞实验检测以上4组的细胞周期变化，其结果显示:与其他各组相比，TMZ联合放射线组G2/M期比例显著增加，差异均具有统计学意义(P＜0.05);与空白对照组相比，药物组和单纯照射组G2/M比例差异无统计学意义(P＞0.05)。
　　 4.免疫细胞化学检测各组之间MGMT的表达率，其结果显示:与其他各组对比，TMZ联合放射线组MGMT的表达率均明显减少，差异具有统计学意义(P＜0.05);与空白对照组相比，药物组、和单纯照射组MGMT表达率差异无统计学意义(P＞0.05)。
　　 结论:
　　 1.TMZ对大鼠C6胶质瘤细胞株具有明显的抑制作用，48 h IC50为913umol/L，72 h IC50为412 umol/L，且抑制作用呈现剂量和时间的依赖关系。
　　 2.TMZ对大鼠C6胶质瘤细胞株具有放射增敏性，在TMZ浓度为182.6umol/L时SER为1.30。
　　 3.TMZ联合放射线照射共同作用于大鼠C6胶质瘤细胞株，可以使C6胶质瘤细胞株的细胞周期阻滞在对放射线敏感的G2/M期，增加放射敏感性，这可能是TMZ联合放射线照射对胶质瘤细胞杀伤作用的机制之一。
　　 4.TMZ下调MGMT的作用明显大于放射照射上调MGMT的作用，这可能是TMZ联合放射线照射对胶质瘤细胞的另外一种杀伤机制。

目录

声明

摘要

前言

材料与方法

1 材料、试剂与仪器

1．1 细胞系

1．2 主要器材

1．3 主要试剂及药物

1．4 实验试剂的配置方法

2 实验方法

2．1 大鼠C6胶质瘤细胞株的培养

2．2 MTT实验测定不同浓度的TMZ对大鼠C6胶质瘤细胞株的抑制率

2．3 克隆形成率观察TMZ对大鼠C6胶质瘤细胞株的放射增敏作用

2．4 流式细胞术检测不同处理组大鼠C6胶质瘤细胞株实验前后的细胞周期变化

2．5 免疫细胞化学检测各组之间MGMT的表达率

3 统计方法

结果

1 MTT法检测TMZ作用于大鼠C6胶质瘤细胞株不同时间的OD值和细胞抑制率

2 182．6 umol／L TMZ联合不同剂量的放射线照射和单纯的不同剂量的放射线照射对大鼠C6胶质瘤细胞株的放射敏感性的影响

3 流式细胞术检测不同处理组大鼠C6胶质瘤细胞株实验前后的细胞周期变化

4 免疫细胞化学检测各组之间MGMT的表达率

讨论

结论

参考文献

综述

致谢