Dyrk1b在子宫颈病变组织及细胞中的表达及意义

摘要

目的:检测和探讨Dyrk1b(Dual specificity tyrosine phosphorylation regulatedkinase1b)在子宫颈病变组织及细胞中的表达及其临床意义。
　　方法:(1)选取2011年1月至2013年12月期间就诊于大连医科大学附属第一医院妇科经子宫颈癌三阶梯筛查且经病理检查证实的子宫颈鳞癌患者75例，依据国际妇产科联盟(FIGO)的分期标准，Ⅰ期患者60例，Ⅱ期患者15例;选取低级别子宫颈病变(LSIL)患者12例，高级别子宫颈病变(HSIL)患者40例，另外选取经病理检查确诊为慢性宫颈炎的子宫颈组织28例为对照。免疫组化SP法分别检测四组子宫颈组织中Dyrk1b蛋白的表达情况;(2)蛋白质印迹法分别检测Hela（HPV18阳性、腺癌细胞）、Siha(pRb、P53阳性)及Caski（HPV16阳性）细胞中Dyrk1b的蛋白表达量，检测Dyrk1b抑制剂(AZ191)（5μM、10μM）作用于Siha、Hela细胞系48h后Dyrk1b蛋白的表达情况;(3)选用子宫颈癌细胞系Hela、Siha、Caski，采用MTT比色法检测不同浓度梯度AZ191(0μM-100μM)作用48h后对细胞生存率的影响;(4)流式细胞术检测AZ191（5μM、10μM）作用于Siha及Hela细胞系48h后对细胞凋亡率的影响。
　　结果:1、慢性宫颈炎、低级别子宫颈病变、高级别子宫颈病变及子宫颈鳞癌组织中Dyrk1b蛋白表达阳性率分别为10.7％(3/28)、8.3％(1/12)、42.5％(17/40)、70.7％(53/75)，子宫颈鳞癌和高级别子宫颈病变明显高于低级别子宫颈病变和慢性宫颈炎(P＜0.01)，子宫颈鳞癌与高级别子宫颈病变相比较，以及高级别子宫颈病变与低级别子宫颈病变相比较，差异均具有统计学意义(P=0.003，P=0.028);而低级别子宫颈病变与慢性宫颈炎相比，差异无统计学意义(P=0.654)。Dyrk1b蛋白的表达与子宫颈鳞癌患者肌层浸润深度明显相关(P＜0.05)，而与年龄、临床分期、淋巴结有无转移、SCC表达及HPV感染均无明显相关性(P＞0.05)。2、Dyrk1b蛋白在Hela、Siha及Caski细胞系中均有不同程度的表达，不同浓度的AZ191作用于Siha、Hela细胞系48h后，能够降低Dyrk1b在子宫颈癌细胞系中的蛋白表达量，呈浓度依赖性。3、不同浓度AZ191对子宫颈癌细胞系均有不同程度的增殖抑制作用，且抑制作用具有浓度依赖性，随抑制剂浓度的增加，对细胞的增殖抑制作用逐渐增强，各浓度组细胞生存率均低于对照组，差异具有统计学意义(P＜0.05)。4、AZ191（5μM、10μM）作用于Siha、Hela细胞系48h后，可诱导细胞发生凋亡并呈浓度依赖性，凋亡倍数随抑制剂浓度的增加而增加，差异具有统计学意义(P＜0.05)。
　　结论:子宫颈癌组织和细胞中Dyrk1b蛋白均呈高水平表达，随着宫颈病变的进展，Dyrk1b蛋白的表达水平逐渐增高，使用Dyrk1b抑制剂下调Dyrk1b后，可抑制肿瘤细胞增殖，诱导细胞发生凋亡，且随着用药浓度的增加，增殖抑制作用增强，凋亡倍数增加;由此推测，Dyrk1b可能参与子宫颈癌的发生和发展。

目录

声明

摘要

前言

资料与方法

一、资料来源

1、临床资料

2、主要细胞

二、实验仪器和试剂

1．主要仪器及耗材

2．主要试剂

三、实验方法

1、免疫组化SP法

2、蛋白质印迹法

3、MTT比色法

4、流式细胞术

四、统计学分析

结果

一、子宫颈病变组织中Dyrk1b蛋白阳性表达率的比较

二、Dyrk1b抑制剂(AZ191)对子宫颈癌细胞蛋白表达水平的影响

三、Dyrk1b抑制剂(AZ191)对子宫颈癌细胞生存率的影响

四、Dyrk1b抑制剂(AZ191)对子宫颈癌细胞凋亡率的影响

讨论

结论

参考文献

综述 宫颈癌发生的分子机制及信号转导通路的研究进展

致谢