DYRK1B在子宫内膜癌组织和细胞中的表达及意义

摘要

目的:检测Dyrk1B在子宫内膜癌组织和各细胞系中的表达，应用AZ191（Dyrk1B抑制剂）“降调”Dyrk1B的表达后，观察其对子宫内膜癌细胞的增殖能力、细胞凋亡率及Dyrk1B蛋白表达水平的影响，探讨Dyrk1B在子宫内膜癌中的作用和意义。
　　方法:(1)体外培养子宫内膜癌细胞株Ishikawa（高分化）、HEC-1A（中分化）、HEC-1B（中分化）、AN3CA（未分化），采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度AZ191（0.5μM，1μM，2.5μM，5μM，10μM，25μM，50μM，100μM）作用48小时后四种细胞的增殖能力。(2)流式细胞术检测AZ191（0μM，5μM，10μM）作用48小时后HEC-1A、HEC-1B和AN3CA的细胞凋亡率。(3)采用蛋白印迹法(Western Blot)检测AZ191（0μM，5μM，10μM）作用48小时后Ishikawa、HEC-1A、HEC-1B和AN3CA细胞中Dyrk1B蛋白的表达。(4)选取2011年1月～2014年9月大连医科大学附属第一医院病理科存档的手术切除石蜡包埋子宫内膜癌组织174例，子宫内膜癌前病变组织35例，选择同期因子宫肌瘤或子宫脱垂行子宫切除术、且术后病理证实为正常子宫内膜组织54例（包括分泌期、增殖期及萎缩期内膜）作为对照组，应用免疫组化法检测Dyrk1B在各组子宫内膜组织中的表达，并分析其与子宫内膜癌患者临床病理因素之间的关系。
　　结果:(1)AZ191作用48小时后，各实验组细胞生存率均明显低于对照组(P＜0.05)，且AZ191对子宫内膜癌各细胞系的抑制作用无差别(P＞0.05)，均呈剂量依赖型。(2) AZ191作用48小时后，实验组细胞的凋亡率与对照组相比均明显上升，差异有显著性(P＜0.05)，其中10μM AZ191诱发受试HEC-1A、HEC-1B和AN3CA三种细胞系发生的细胞凋亡率均上升近2倍。(3) AZ191作用48小时后，蛋白印迹法检测发现实验组细胞的Dyrk1B蛋白表达水平均低于对照组，且呈浓度依赖型。(4)免疫组化检测显示，Dyrk1B在子宫内膜癌组与子宫内膜癌前病变组中均呈高水平表达，其表达率分别为73.6％(128/174)，80％(28/35)，两组间无差异(P＞0.05)，但两组分别与对照组比较，差异均有统计学意义(P＜0.05)。同时，也发现Dyrk1B在子宫内膜癌组织中的表达强度与肌层浸润深度有关(P＜0.05)，与病理分型、分期、分级均无关（P均＞0.05）;在血清CA125、CA19-9水平异常升高组中Dyrk1B均呈高表达，表达率分别为89.4％(42/47)、87.5％(28/32)，与血清水平正常组相比差异均有统计学意义(P＜0.05)。
　　结论:Dyrk1B在子宫内膜癌组织和细胞中均有表达，抑制剂AZ191“降调”Dyrk1B在子宫内膜癌细胞中的表达后可明显促进细胞凋亡和抑制细胞增殖。因此，推测Dyrk1B可能参与了子宫内膜癌的发生和发展，其可能成为未来治疗子宫内膜癌的新靶点。

目录

声明

摘要

前言

材料与方法

一、主要材料

1．细胞来源

2．临床标本来源

3．主要试剂与耗材

4．主要实验仪器

二、方法

1．细胞培养及传代

2．MTT比色法检测不同浓度AZ191作用48小时后子宫内膜癌细胞的增殖能力

3．流式细胞仪检测不同浓度AZ191作用48小时后子宫内膜癌细胞的凋亡倍数

4．蛋白印迹法检测不同浓度AZ191作用48小时后子宫内膜癌细胞中Dyrk1B蛋白的表达

5．免疫组化染色法检测Dykr1B在子宫内膜癌组织中的表达

三、统计学处理

结果

1．AZl91对子宫内膜癌细胞株Ishikawa、HEC-1A、HEC-1B及AN3CA细胞生存率的影响

2．AZ191诱导子宫内膜癌细胞HEC-1A、HEC-1B和AN3CA发生细胞凋亡的结果

3．AZ191对Ishikawa、HEC-1A、HEC-1B和AN3CA细胞的Dyrk1B蛋白表达水平的影响

4．免疫组化检测Dyrk1B在子宫内膜癌组织中的表达

讨论

一、Dyrk1B简介

二、Dyrk1B在子宫内膜癌细胞及子宫内膜癌组织中的表达

三、Dyrk1B介导子宫内膜癌细胞的凋亡过程

四、Dyrk1B在子宫内膜癌组织中的表达与临床病理因素的关系

结论

参考文献

综述 子宫内膜癌多种细胞信号转导通路的研究进展

致谢