重金属及农药残留对鹿茸有效成分抗乳腺癌活性影响的研究

摘要

近年来，中药材环境污染问题层出不穷，我国出口的中药材在国际市场上多次因污染问题被查封，重金属、农药残留等问题已成为中药材走向世界的“绊脚石”，因此，合理检测和限定中药材中重金属及农药残留的量是保障用药安全，推动中药走向国际化的关键。鹿茸作为宝贵的中药材，药理作用经久不衰，目前针对鹿茸的研究大多集中在对其化学成分的分析上，而鹿茸的众多药理作用，如抗肿瘤作用，亟待开发与利用。本文以中药材鹿茸为研究对象，首先对不同产地、不同种属、不同部位的九种鹿茸样品中的重金属及农药残留进行测定分析，参照相关国家标准评价鹿茸是否受到污染。接下来，基于鹿茸的抗肿瘤功效，探究重金属及农药残留对鹿茸有效成分抗乳腺癌活性的影响。 本文运用气相色谱法检测了新西兰梅花鹿茸特粉、红粉、蜡片，吉林梅花鹿茸红粉、黄粉、蜡片，吉林马鹿茸粉片、沙片、蜡片中六六六的4个异构体、滴滴涕的4个异构体及五氯硝基苯的含量，运用电感耦合等离子体质谱法检测了九种鹿茸中铅、镉、铜、砷、汞的含量。实验结果表明，所检测的九种鹿茸样品中以上有害物质含量均符合国家的限量标准，但本研究发现作为动物药的鹿茸也存在一定量的农药残留，且鹿茸中个别检测指标，如重金属铜，含量较高，这提示我们在使用前需对鹿茸中的重金属及农药残留进行合理检测和分析以保障人民用药安全。 本文选取重金属及农药残留量较高的新西兰梅花鹿茸特粉、吉林梅花鹿茸蜡片及吉林马鹿茸粉片作为君药制备鹿茸补肾汤。通过MTT增殖实验及细胞划痕实验表明，三种鹿茸补肾汤均能抑制乳腺癌细胞增殖和迁移，且无显著差异，即在本研究中重金属及农药残留对鹿茸有效成分的抗乳腺癌活性没有显著影响。本研究分别运用MTT增殖法、细胞划痕法、胰蛋白酶消化法检测了鹿茸补肾汤对乳腺癌MDA-MB-231细胞体外增殖、迁移、黏附的影响，通过酶联免疫吸附实验、蛋白质免疫印迹实验检测了Notch-1、Hes-1、Hey-1、Bcl-2、Bax的蛋白表达变化。结果表明，鹿茸补肾汤对MDA-MB-231细胞体外增殖、迁移具有抑制作用，同时，抑制Notch-1信号通路活性。此外，通过类似的实验方法，本课题研究表明，鹿茸提取物—鹿茸多肽能够抑制乳腺癌MDA-MB-231、MCF-7细胞增殖和迁移，同样抑制Notch-1信号通路活性。由此推测鹿茸补肾汤及鹿茸多肽可能通过调节Notch-1信号通路抑制乳腺癌细胞增殖和迁移，可能是乳腺癌治疗的潜在靶点和新策略。

目录

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1.1 中药材污染研究现状

1.1.1 前言

1.1.2 农药残留

1.1.3 重金属残留

1.2 中药材鹿茸

1.2.1 鹿茸的来源及利用

1.2.2 鹿茸的化学成分

1.2.3 鹿茸的药理作用

1.2.4 鹿茸的抗肿瘤作用

1.3 乳腺癌及其治疗

1.3.1 中药抗乳腺癌研究

1.3.2 Notch信号通路与乳腺癌

1.4 鹿茸补肾汤

1.5 鹿茸多肽

1.6 论文选题依据及研究内容

2.1 实验材料与设备

2.1.1 实验药材

2.1.2 实验试剂

2.1.3 实验仪器

2.2 实验方法

2.2.1 农药残留检测

2.2.2 重金属检测

2.3 实验结果

2.3.1 农药残留检测结果

2.3.2 重金属检测结果

2.4 本章小结

3.1 实验材料与设备

3.1.1 实验药材

3.1.2 实验试剂

3.1.3 实验仪器

3.1.4 细胞株

3.2 实验方法

3.2.1 溶液配制

3.2.2 鹿茸补肾汤的煎煮和冻干

3.2.3 细胞培养

3.2.4 MTT实验

3.2.5 细胞划痕实验

3.2.6 胰蛋白酶消化实验

3.2.7 酶联免疫吸附实验

3.2.8 Western Blot实验

3.2.9 统计学处理

3.3 实验结果

3.3.1 鹿茸补肾汤及其冻干粉制备

3.3.2 鹿茸补肾汤对乳腺癌细胞增殖的影响

3.3.3 鹿茸补肾汤对293T、ADSCs细胞增殖的影响

3.3.4 鹿茸补肾汤对乳腺癌细胞迁移的影响

3.3.5 鹿茸补肾汤对乳腺癌细胞黏附力的影响

3.3.6 鹿茸补肾汤对Notch-1、Hes-1蛋白表达的影响

3.3.7 鹿茸补肾汤对Notch-1、Hey-1、Bcl-2、Bax蛋白表达的影响

3.4 本章小结

4.1 实验材料与设备

4.1.1 实验试剂

4.1.2 实验仪器

4.1.3 细胞株

4.2 实验方法

4.2.1 溶液配制

4.2.3 MTT实验

4.2.4 细胞划痕实验

4.2.6 Western Blot实验

4.2.7 统计学处理

4.3 实验结果

4.3.1 鹿茸多肽对乳腺癌细胞增殖的影响

4.3.2 鹿茸多肽对乳腺癌细胞迁移的影响

4.3.3 鹿茸多肽对Notch-1、Hes-1蛋白表达的影响

4.3.4 鹿茸多肽对Notch-1、Bcl-2、Bax蛋白表达的影响

4.4 本章小结