人骨髓间充质干细胞体外成骨分化及与Bio-gide胶原膜复合培养的实验研究

摘要

目的：本实验拟研究人骨髓间充质干细胞(human mesenchymal stem cells，hMSCs)分离、培养与鉴定的方法，观察其成骨细胞表型特征，探讨其作为牙周组织工程种子细胞的可行性；将Bio-gide胶原膜与hMSCs进行体外复合培养，行形态学观察。 方法：体外分离培养hMSCs，进行形态学观察，增殖测定，细胞表面抗原检测；取生长状态的良好的第三代hMSCs，分别于不同培养条件下(实验组：成骨诱导液；对照组：普通培养液)进行培养，检测细胞碱性磷酸酶表达及矿化能力。将hMSCs与Bio-gide胶原膜进行体外复合培养，通过倒置相差显微镜，扫描电镜进行观察。 结果：梯度密度离心法结合贴壁筛选法能获得高纯度高活性的hMSCs。经成骨诱导后可表达高水平碱性磷酸酶活性(p＜0.05)，连续培养28天左右可形成矿化结节。hMSCs可在Bio-gide胶原膜上贴附增殖，并复层生长。 结论：hMSCs 取材方便、创伤小；具有成骨分化潜能，经诱导后具有成骨细胞表型特征。hMSCs可作为牙周组织工程种子细胞来源。Bio-gide胶原膜可作为细胞生长载体，有望成为hMSCs的支架材料应用于牙周组织工程研究。

目录

文摘

英文文摘

声明

第1章前言

第2章材料和方法

2.1主要仪器和试剂

2.2 hMSCs的分离和培养

2.3 hMSCs形态观察

2.4 hMSCs生长曲线测定

2.5 hMSCs免疫组织化学鉴定

2.6体外诱导培养hMSCs碱性磷酸酶(ALP)活性检测

2.7 hMSCs体外培养矿化能力检测

2.8 hMSCs/Bio-gide胶原膜复合物的制备及生物特性检测

第3章实验结果

3.1原代hMSCs形态学观察

3.2传代hMSCs形态学观察

3.3 hMSCs体外培养生长曲线和倍增时间

3.4 hMSCs免疫组织化学染色

3.5 hMSCs碱性磷酸酶(ALP)活性检测

3.6 hMSCs体外培养矿化能力检测

3.7倒置相差显微镜观察

3.8扫描电镜观察

第4章讨论

第5章结论

致谢

参考文献

附图

综述 牙周组织工程最新研究进展

攻读学位期间研究成果