人脂肪来源基质细胞原代培养及成脂分化

摘要

目的: 将人脂肪来源基质细胞的原代培养，进行脂肪定向诱导分化。探讨冻存后的ADSCs的特点和脂肪分化潜能，为临床应用提供实验室资料 方法: 取人腹部皮下脂肪，用酶消化法分离出单个核细胞，观察其形态学变化。细胞冻存于液氮中6个月，复苏后观察其生长变化和脂肪分化潜能。细胞脂肪诱导以含地塞米松、1-甲基-3-异丁基-黄嘌呤、胰岛素的培养基作为脂肪定向诱导培养基。以油红O染色检测细胞内脂质沉积，观察细胞形态学变化和计数分化细胞数。 结果: 原代培养的细胞形态均一，呈成纤维样，增殖力旺盛，可持续培养至15代。脂肪定向诱导培养后，第3天就可见细胞内核周有脂肪滴沉积。细胞形态的变化和油红O染色都证明这些细胞内有脂肪的沉积。诱导第9天细胞内出现大量脂质沉积，在17天左右达到高峰。2周以后，大约90％左右的细胞定向分化为成熟的脂肪细胞。冻存和新鲜的ADSCs生长特点相似，脂肪分化潜能没有差别(P＞0.5)。 结论: 在成熟的脂肪组织中存在基质细胞，具有自我增殖更新和脂肪分化潜能的特点。冻存后的细胞复苏后仍能继续传代培养，并且能保持较好的脂肪分化潜能。

目录

文摘

英文文摘

声明

第一章引 言

第二章材料与方法

2.1研究对象

2.2试验试剂

2.3主要液体的配制方法

2.4实验仪器

2.5实验方法

2.6体外ADSCs脂肪诱导分化

2.7统计学处理

第三章结果

3.1细胞原代培养

3.2脂肪诱导不同时间段形态学观察

3.3未冻存细胞与冻存细胞的诱导分化比较

第四章讨论

第五章结论与展望

致谢

参考文献

附录 A 脂肪来源间充质细胞研究动态

攻读硕士期间研究成果