黑灵芝甾醇类的结构表征及其提取物活性和指纹图谱研究

摘要

灵芝是一种药用真菌，种类繁多，包括赤芝、紫芝、白芝、黄芝、黑芝、薄盖灵芝等。我国应用灵芝作为药物已有悠久的历史，现代医学实验证明灵芝具有抗肿瘤、免疫增强等作用，可用于防治肿瘤、高血脂症、冠心病、慢性支气管炎、神经衰弱、肝炎、白细胞减少等。国内外研究过的灵芝属真菌仅有赤芝、紫芝、树舌、薄盖灵芝、南方灵芝等五种，其中研究最多的是赤芝，紫芝次之。对于黑灵芝的研究，目前国内极少有报道。本文以江西赣南出产的黑灵芝为研究对象，对其活性成分进行了提取分离、结构表征和体外活性研究；在此基础上，采用模式识别技术对黑灵芝及不同产地的赤灵芝的GC-MS指纹图谱进行了化学分类研究，以期为灵芝的分类和鉴定提供一定的参考依据。本研究在一定程度上弥补了黑灵芝研究的空白，为黑灵芝的合理利用奠定了理论基础。现将主要研究概述如下： 1．分离纯化得到了四个甾醇类的单体化合物。采用常压硅胶柱色谱和反相高效液相制备色谱技术对黑灵芝的中性氯仿提取物进行了分离纯化，得到四个甾醇类的单体化合物，经UV、EI-MS、<'1>H-NMR和 <'13>C-NMR 鉴定为：麦角甾-4,6,8(14),22- 四烯-3-酮 (ergosta-4,6,8(14),22-tetraen-3-one)、麦角甾醇(ergosterol)、麦角甾-7，22-二烯-3p-醇 (ergosta-7,22-dien-3β-ol)、麦角甾-7-烯-3β-醇 (ergosta-7-en-3β-ol)。 2．研究了高速逆流色谱技术在黑灵芝总甾醇部分纯化中的应用。应用高速逆流色谱(HSCCC)技术对黑灵芝总甾醇部分进行了分离纯化研究，得到高纯度的单体化合物麦角甾-4，6，8(14),22-四烯-3 酮 (ergosta-4,6,8(14)，22-tetraen-3-one)，该方法费用低廉，重现性好，可作为制备高纯度麦角甾-4，6，8(14)，22-四烯-3 酮的方法。 3．研究了黑灵芝95％乙醇提取物的不同极性部分的体外抗氧化能力。利用DPPH 自由基体系法，对黑灵芝95％乙醇提取物的不同极性部分进行了抗氧化能力的测定，并与合成抗氧化剂 BHT 清除自由基的能力进行了比较。黑灵芝95％乙醇提取物的各极性部分均具有清除 DPPH 自由基的作用，乙酸乙酯部分的抗氧化能力最强，正丁醇部分次之，石油醚部分最弱。 4．对灵芝进行了指纹图谱研究。以甾醇类化合物为考察指标，获得了4个黑灵芝样本、12个不同产地赤灵芝样本的GC-MS指纹图谱，并采用系统聚类分析和逐步判别分析进行了化学分类研究。上述模式识别技术可以按灵芝的品种、产地将其较合理地分为几类，这对灵芝品种与质量的鉴定有一定的理论意义和实用价值。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：符号说明

声明

第1章 引言

1.1灵芝研究进展

1.1.1灵芝的分类及分布

1.1.2灵芝的化学成分研究

1.1.3灵芝的质量控制研究

1.2高速逆流色谱研究进展

1.2.1高速逆流色谱原理

1.2.2高速逆流色谱的特点及溶剂选择

1.2.3高速逆流色谱在天然产物有效成分分离中的应用

1.3中药指纹图谱概述

1.3.1中药指纹图谱简述

1.3.2指纹图谱研究方法和应用

1.3.3化学计量学在中药指纹图谱研究中的应用

1.4本研究的目的意义、主要研究内容和创新性

1.4.1本研究的目的意义

1.4.2本研究主要内容

1.4.3本研究的创新性

第2章 黑灵芝中甾醇类化合物的分离、纯化及结构鉴定

2.1实验部分

2.1.1材料与试剂

2.1.2主要仪器与设备

2.1.3实验方法

2.2结果与讨论

2.2.1 8∶1洗脱部分纯化与纯度检验

2.2.2 5∶1洗脱部分纯化与纯度检验

2.2.3化合物1，2，3，4的结构表征

本章小结

第3章 黑灵芝甾醇的高速逆流色谱法分离

3.1实验部分

3.1.1材料与试剂

3.1.2实验仪器

3.1.3实验方法

3.2结果与讨论

3.2.1黑灵芝总甾醇提取物的HPLC分析

3.2.2溶剂系统的选择

3.2.3 HSCCC分离参数的选择

3.2.4峰1(Fr2)的纯度测定

3.2.5峰1(Fr2)的结构鉴定

本章小结

第4章 黑灵芝提取物体外抗氧化活性研究

4.1实验部分

4.1.1主要试剂及仪器

4.1.2实验方法

4.2结果与讨论

4.2.1波长-吸光度之间的关系

4.2.2体系的显色稳定性

4.2.3不同极性部分清除DPPH自由基的能力

4.2.4各极性部分与BHT清除自由基能力的比较

本章小结

第5章 不同品种、产地灵芝的GC-MS指纹图谱研究

5.1实验部分

5.1.1材料和试剂

5.1.2实验设备

5.1.3实验方法

5.2结果与讨论

5.2.1指纹图谱的方法学考察

5.2.2共有色谱峰的指定

5.2.3共有色谱峰的定性

5.2.4不同品种、产地灵芝的系统聚类分析

5.2.5不同品种、产地灵芝的逐步判别分析

本章小结

第6章 结论与展望

6.1结论

6.2进一步工作的方向

致谢

参考文献：

附录

攻读学位期间的研究成果