超声引导肝内无水乙醇注射术后动态观察及再生研究

摘要

目的:本文旨在研究大鼠在超声引导下肝脏经皮乙醇注射术(PEI)后,肝功能恢复情况以及肝脏组织是否存在再生及再生特点。初步探索PEI术在动物实验中的可行性,并为今后超声在肝脏等器官的介入治疗和诊断中提供实验依据。
　　方法:取SD大鼠40只,术前腹腔注射1％戊巴比妥35mg/kg,麻醉后,使用IU22型超声诊断仪,探头频率为5MHZ-12MHZ作肝脏定位引导,采用1ml注射器,4号半注射针头,将无水乙醇缓慢注入大鼠肝脏中叶,每只剂量为0.1ml。注射后分别在第1、3、5、7天取血,检测血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)含量,以观察肝功能恢复情况;取完血立即取出肝脏,切下注射部位周边正常肝组织,剥离肝包膜及肝内结缔组织,放入0.01M的磷酸盐缓冲液(PBS)中冲洗、剪碎、胶原酶消化、制成单细胞悬液,并用80％乙醇固定。固定后PBS洗两次,加碘化丙锭(PI)和0.1％RNA酶(RnaseA),行流式细胞分析S期肝细胞百分含量(S期肝细胞数/活细胞总数);乙醇注射部位周围肝组织置于10％福尔马林中固定、脱水、制成石蜡切片,常规HE染色测定肝组织的有丝分裂指数(MI)、Feulgen染色测定细胞核DNA含量以及免疫组织学检测肝组织的增殖细胞核抗原(PCNA)。
　　结果:PEI术后第1、3天大鼠肝脏有丝分裂指数,细胞核DNA含量,PCNA阳性细胞量及S期细胞比率均比术前明显增高(P＜0.01),并且在第3天达到峰值:MI为(1.76±0.20)％,SPR为(16.53±2.96)％,DNA含量为(8.68±0.94)％,PCNA为(11.08±1.65)％;第5天各项再生指标明显减弱,第7天恢复术前水平。大鼠的肝功能在术后第1天升高最明显,AST为(417.02±25.07)U/L,ALT为(357.93±26.83)U/L,随后开始下降,直至第七天恢复术前水平。
　　结论:大鼠肝脏PEI注射后的无水乙醇具有脱水、凝固作用,并造成血管栓塞,可直接引起大鼠肝组织的脱水凝固和缺血坏死,术后的乙醇局限性扩散作用,也可引起远处肝细胞坏死,从而导致肝功能受损,并且进一步促使其周围肝组织的一定程度再生。其再生规律及肝功能恢复规律对临床应用经皮肝内无水乙醇注射术治疗肝癌有一定指导意义。超声引导经皮肝内无水乙醇注射硬化治疗具有损伤小、可重复性好、疗效确切、副反应小、操作简单、恢复快、易被患者所接受等优点,因此具有广泛的应用前景。

目录

摘要

ABSTRACT

第1章 引言

第2章 材料与方法

2.1 实验设计

2.2 动物

2.3 模型制备

2.4 实验方法

2.4.1 主要仪器和试剂

2.5 实验步骤

2.5.1 超声引导下经皮肝内无水乙醇注射技术

2.5.2 标本采集

2.5.3 肝功能检测

2.5.4 肝再生指标检测

2.6 统计方法

第3章 结果

3.1 超声引导下经皮肝内无水乙醇注射术时声像图改变

3.2 肝功能检测结果

3.3 肝再生检测

3.3.1 PEI 术前与术后大体肝脏比较

3.3.2 S 期细胞比率（SPR）检测结果

3.3.3 HE 染色检测结果

3.3.4 Feulgen 染色检测结果

3.3.5 增殖细胞核抗原（PCNA）的表达水平检测结果

第4章 讨论

第5章 结论

致谢

参考文献

附图

综述

攻读学位期间的研究成果