姜黄素抑制磨损颗粒诱导EMMPRIN、MMP-2、MMP-9表达实验研究

摘要

目的：观察姜黄素对注有聚乙稀磨损颗粒小鼠air-pouch动物模型囊壁组织炎性反应及EMMPRIN、MMP-2、MMP-9表达的影响，并探讨姜黄素干预磨损颗粒刺激EMMPRIN、MMP-2、MMP-9表达的作用机制。 方法：将高分子聚乙烯材料在体外加工成粒径小于10μm的磨损颗粒。取健康昆明系小鼠72只，构建air-pouch动物模型成功后于囊腔中注入3 mL浓度为1×108个/mL聚乙稀颗粒悬液。动物模型随机分为3组（n=24只），实验对照组（A组）：含6％聚乙二醇和含6％无水乙醇生理盐水腹腔注射0.6 mL/d；低剂量（50mg/kg*d）实验组（B组）：浓度为1.6 mg/mL姜黄素溶液腹腔注射0.6 mL/d；高剂量（100mg/kg*d）实验组（C组）：浓度为3.2 mg/mL姜黄素溶液腹腔注射0.6mL/d。术后观察动物一般情况，于给药后3、7及14 d每组分别处死动物8只，取背部囊壁组织行大体、组织学观察及免疫组织化学、RT-PCR、Western blot检测。 结果：各组小鼠均存活至实验完成。各组小鼠背部皮下均可见一白色的囊腔组织，各时间点A组囊腔直径大于B、C组，14dC组囊壁直径明显小于B组。镜下观察7d、14dA组炎性反应强于B、C组。7、14d给药组炎性细胞计数明显低于对照组，C组明显低于B组（P<0.05），3d各组间比较无统计学意义。给药后7d B、C组与A组囊壁组织中MMP-2、MMP-9基因表达和阳性细胞率差异有统计学意义（P<0.05），EMMPRIN表达无明显差异（P>0.05）。给药后14 d B、C组与A组囊壁组织中EMMPRIN、MMP-2、MMP-9基因表达和阳性细胞率差异有统计学意义（P<0.05），而给药后3 d各组间EMMPRIN、MMP-2、MMP-9表达比较差异无统计学意义（P>0.05）。给药后7dC组MMP-9基因表达、阳性细胞率与B组比较有明显差异（P<0.05），而C组EMMPRIN、MMP-2基因表达、阳性细胞率与B组比较无统计学意义（P>0.05），给药后14 dC组MMP-9基因表达、阳性细胞率与B组比较差异显著（P<0.01），C组EMMPRIN基因表达及阳性细胞率与B组比较差异明显（P<0.05），MMP-2基因及阳性细胞率表达与B组比较差异无统计学意义（P>0.05），给药后组织核内NF-κ BP65表达受到明显抑制，7d、14 d给药组NF-κ BP65表达量明显低于实验对照组（P<0.05），且C组表达量明显低于B组（p<0.05），3d时三组间比较无统计学意义（P>0.05）。 结论：小鼠air-pouch动物模型能较好的模拟假体周围微环境，磨损颗粒可以刺激囊壁组织EMMPRIN、MMP-2、MMP-9的表达，且呈时间相关性。姜黄素可以抑制air-pouch动物模型囊壁组织中炎性反应及EMMPRIN、MMP-2、MMP-9的表达，对于EMMPRIN、MMP-9的表达高剂量组抑制效果强于低剂量，而高剂量，低剂量姜黄素对MMP-2表达抑制效果无明显差异。姜黄素可能通过抑制NF-κ B的表达来调节囊壁组织中EMMPRIN、MMP-2、MMP-9的释放。

目录

文摘

英文文摘

声明

第1章前言

第2章材料与方法

2.1 实验试剂与材料

2.2 主要溶液成份与配制

2.3主要仪器与设备

2.4 研究方法

2.5实验数据的统计学分析

第3章结果

3.1 肉眼和光镜下观察

3.2 RT-PCR检测

3.3免疫组织化学观察

3.4 Western blot检测

第4章讨论

4.1 实验动物模型

4.2磨损颗粒特征与假体周围骨溶解

4.3 基质金属蛋白酶与假体周围骨溶解

4.4姜黄素抑制假体周围蛋白水解酶的释放

第5章结论

参考文献

致谢

附图

综述基质金属白酶与假体周围骨溶解关系研究进展

攻读学位期间的研究成果