人诱导性多能干细胞向表皮样干细胞分化的初步研究

摘要

目的：
　　 观察人诱导性多能干细胞的体外培养与特性，探讨人诱导性多能干细胞向表皮样干细胞定向分化的可行性，为其作为皮肤组织工程种子细胞的新来源提供实验基础。
　　 方法：
　　 取已作灭活处理的CF-1小鼠胚胎成纤维细胞作饲养层，人诱导性多能干细胞接种于饲养层上，加入含碱性成纤维细胞生长因子的胚胎干细胞培养液进行培养，Ⅳ型胶原酶消化法传代，倒置显微镜下观察人诱导性多能干细胞形态及生长状况，碱性磷酸酶染色检测，悬浮培养观察拟胚体形成能力。根据并仿效人体皮肤发育规律，将人羊膜铺布培养板底，消化传代的人诱导性多能干细胞接种于其上，加入不含碱性成纤维细胞生长因子的胚胎干细胞培养液继续培养。以不加羊膜作为对照组。观察诱导后细胞形态学变化，免疫细胞化学染色法检测β1整合素和CK19表达。
　　 结果：
　　 在本培养体系条件下培养的人诱导性多能干细胞形态学上呈典型的干细胞克隆状生长，边界清楚，细胞增殖旺盛；碱性磷酸酶检测呈阳性表达；在无饲养层悬浮培养条件下形成拟胚体。诱导培养4天后在羊膜表面形成干细胞克隆，部分细胞β1整合素和CK19呈阳性表达。而对照组大量细胞死亡，未见β1整合素和CK19阳性细胞。
　　 结论：
　　 在本培养体系条件下培养的人诱导性多能干细胞生长稳定，其生物学特性与人胚胎干细胞相似。在羊膜诱导下人诱导性多能干细胞可定向分化为表皮样干细胞，具有作为皮肤组织工程种子细胞新来源的潜能。为进一步诱导分化研究和其在再生医学与皮肤组织工程中的应用奠定了实验基础。