红细胞生成素对白蛋白诱导人近端肾小管上皮细胞转分化的影响及其与TGFβ1/ILK通路的关系

摘要

目的：探讨红细胞生成素(EPO)对人白蛋白诱导的人近端肾小管上皮细胞(HK-2细胞)间充质转分化过程的影响，以及TGFβ1/ILK信号通路与此过程的关系，寻找EPO延缓肾纤维化作用的可能机制。
　　 方法将体外培养的HK-2细胞随机分组：①空白对照组：未加任何刺激物；②EPO诱导组：20U/ml EPO；③白蛋白诱导组：5mg/ml白蛋白；④EPO干预组：不同浓度EPO(5、10、20U/ml)及5mg/ml白蛋白；⑤转化生长因子β1(TGFβ1)拮抗剂组：TGFβ1受体阻断剂(SB431542)及5mg/ml白蛋白，以上各组均刺激24h。应用RT-PCR法检测细胞TGFβ1、ILK mRNA的转录水平：细胞免疫荧光法检测细胞E-钙黏蛋白(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的蛋白表达水平：ELISA法检测细胞上清液纤连蛋白(FN)的蛋白表达水平。
　　 结果：①RT-PCR结果表明白蛋白诱导组TGFβ1、ILK mRNA较空白对照组及EPO诱导组显著升高(P<0.05)，5、10、20U/ml EPO干预组TGFβ1、ILK mRNA保护性下调(P<0.05)，且随EPO浓度升高作用更加显著，TGFβ1拮抗剂组ILKmRNA亦较白蛋白诱导组显著下降(P<0.05)；②细胞免疫荧光结果显示白蛋白诱导组E-cadherin的蛋白表达较空白对照组显著下降，α-SMA的蛋白表达显著上升(P均<0.05)，而在EPO干预组及TGFβ1拮抗剂组E-cadherin的蛋白表达较白蛋白诱导组显著上调，α-SMA的蛋白表达显著下调(P均<0.05)，且与EPO的浓度有关；③ELISA结果提示FN的蛋白表达在EPO干预组及TGFβ1拮抗剂组较白蛋白诱导组显著下降(P<0.05)；④Pearson相关分析结果显示白蛋白诱导组及EPO干预组TGFβ1 mRNA、ILK mRNA表达的水平呈正相关(r=0.9，0.895，0.825，0.948，P<0.05)。
　　 结论：人白蛋白可以通过上调体外培养的HK-2细胞TGFβ1、ILK mRNA的表达，使细胞E-cadherin的蛋白减少，α-SMA的蛋白表达增加，诱导细胞间充质转分化的发生，导致细胞外基质FN的蛋白增加；EPO呈浓度依赖性抑制白蛋白诱导HK-2细胞转分化过程，最终延缓肾纤维化，其机制可能与EPO抑制TGFβ1/ILK信号通路有关。