人剪切修复基因XPD对人肝癌细胞中Ets-1和Cdk6基因的调控作用

摘要

目的:研究野生型XPD基因转染入人肝癌细胞SMMC-7721后，细胞内XPD、Ets-1和Cdk6基因的表达情况以及对SMMC-7721肝癌细胞增殖的影响。
　　方法:应用瞬时转染法将人工合成的pEGFP-N2-XPD重组质粒通过Lipofectamine2000TM脂质体转染入SMMC-7721细胞。实验分为转染重组质粒细胞 SMMC-7721-pEGFP-N2-XPD组、转染空载质粒细胞SMMC-7721-pEGFP-N2组、脂质体组、空白对照组，共四组。用逆转录PCR(RT-PCR)检测四组细胞中XPD、Ets-1、Cdk6基因的mRNA表达量，蛋白印迹法(Western blot)检测四组细胞中XPD、Ets-1、Cdk6基因的蛋白质表达情况，并用流式细胞仪和四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)分别检测四组细胞周期变化和细胞的增殖活力。
　　结果:四组细胞中，发现在转染XPD的细胞组中，XPD的mRNA和蛋白表达明显增高(P＜0.01)，Ets-1、Cdk6的mRNA和蛋白表达明显减少(P＜0.01)，其它三组没有差异。流式细胞仪检测发现与其他三组相比，转染pEGFP-N2-XPD重组质粒后细胞难于进入S期，停滞在G1期。MTT检测示野生型XPD转染入SMMC-7721后较其他三组细胞增殖能力减弱。
　　结论:野生型XPD基因可能通过抑制Ets-1、Cdk6基因的表达干扰肝癌细胞的生长。

目录

声明

摘要

第1章 前言

第2章 材料与方法

2．1 实验材料

2．1．1 细胞和质粒

2．1．2 主要实验试剂

2．1．3 主要仪器设备

2．2 实验方法

2．2．1 试剂配制

2．2．2 SWC-7721细胞培养

2．2．3 质粒提取

2．2．4 质粒转染入SMMC-7721细胞

2．2．5 RT-PCR分析

2．2．6 Western blot

2．2．7 流式细胞仪检测细胞周期

2．2．8 MTT

2．2．9 统计学方法

第3章实验结果

3．1 pEGFP-N2-XPD质粒转染结果

3．2 各组细胞XPD、Ets-1及Cdk6 mRNAs表达情况

3．3 各组细胞XPD、Ets-1及Cdk6蛋白表达情况

3．4 pEGFP-N2-XPD重组质粒转染对SMMC-7721细胞周期的影响

3．5 转染重组质粒后细胞增殖活力的变化

第4章 讨论

第5章 结论

致谢

参考文献

攻读硕士学位期间的研究成果

综述 Ascll与成纤维细胞转化为功能性神经元的关系

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