人肺腺癌A549干细胞球和A549细胞系线粒体融合蛋白表达的研究

摘要

肺癌是严重危害人类健康的恶性肿瘤之一;其转移和复发是治疗的两大难点。既往研究表明，肿瘤干细胞在肿瘤形成、复发、恶性转移和化疗耐药中起重要作用，具有较强的抗凋亡能力。线粒体是细胞凋亡的主要器官，而且线粒体在细胞凋亡中起关键作用。线粒体不断经历着融合和分裂活动改变;研究表明，线粒体融合可加强细胞抗凋亡能力;对正常细胞具有保护作用，对肿瘤细胞则具有抗凋亡能力。但是线粒体融合是否参与肿瘤干细胞的耐药机制，尚缺乏相关的报道。
　　目的：探讨人肺腺癌A549来源的A549细胞球与A549细胞系线粒体融合表达的差异性。
　　方法：采用无血清培养基（serum-free medium，SFM）的方法培养出人肺腺癌A549细胞的肿瘤干细胞，再诱导A549细胞球体的形成;最后使用实验方法RT-PCR和Western blotting检测人肺腺癌A549肿瘤干细胞球和人肺腺癌A549细胞系的线粒体融合蛋白（Mfn1、Mfn2、OPA1）表达。
　　结果：人肺腺癌A549细胞球和细胞系Mfn1蛋白的mRNA和蛋白表达水平分别为(0.16±0.04)和(0.29±0.04);p＜0.05;两组细胞Mfn2 mRNA和蛋白表达分别为(0.16±0.03)和(0.28±0.09);P＜0.05;两组细胞OPA1 mRNA和蛋白表达分别为(0.13±0.04)和(0.39±0.05;P＜0.05。
　　结论：⑴人肺腺癌A549来源的A549细胞球的线粒体融合蛋白(Mfn1、Mfn2、OPA1)表达比A549细胞系表达增高。⑵推测人肺腺癌A549来源的A549细胞球的线粒体融合过程可能参与肿瘤干细胞耐药的机制。

目录

声明

摘要

中英文缩略词表

第1章 引言

第2章 材料与方法

2．1 实验材料

2．1．1 实验细胞株

2．1．2 主要试剂及来源

2．1．3 主要仪器和设备

2．1．4 主要试剂配制

2．2 实验方法

2．2．1 细胞的培养及分组

2．2．2 RT-PCR法检测两组细胞的Mfn1、Mfn2、Opa1蛋白表达

2．2．3 蛋白免疫印迹法检测两组细胞的线粒体融合蛋白Mfn1、Mfn2、Opa1的蛋白表达

2．3 统计方法

第3章 结果

3．1 人肺腺癌A549细胞及A549细胞球培养的形态观察

3．2 RT-PCR法检测结果

3．2．1 RT-PCR方法检测两组细胞线粒体融合蛋白Mfn1的mRNA表达

3．2．2 RT-PCR方法检测两组细胞线粒体融合蛋白Mfn2的mRNA表达

3．2．3 RT-PCR方法检测两组细胞线粒体融合蛋白OPA1的mRNA表达

3．3 蛋白免疫印迹法检测结果

3．3．1 蛋白免疫印迹法检测两组细胞线粒体融合蛋白Mfn1蛋白表达

3．3．2 蛋白免疫印迹法检测两组细胞线粒体融合蛋白Mfn2蛋白表达

3．3．3 蛋白免疫印迹法检测两组细胞线粒体融合蛋白OPA1蛋白表达

第4章 讨论

4．1 肿瘤干细胞耐药机制

4．2 线粒体融合的研究进展

4．3 肺癌干细胞研究进展及干细胞面临的挑战

4．4 实验思路和方法的完善

第5章 结论与展望

5．1 结论

5．2 展望

致谢

参考文献

攻读学位期间的研究成果

综述 线粒体动态学与肿瘤、肿瘤干细胞相关形态研究