同型半胱氨酸与特发性心房颤动的关系及对心房肌细胞Cx43表达的影响

摘要

目的：
　　我们前期研究发现，同型半胱氨酸（Homocysteine，Hcy）水平升高与心房颤动（房颤，atrial fibrillation，AF）射频消融术后复发呈独立相关。为此，本研究首先拟从临床观察特发性心房颤动患者血浆Hcy水平，进一步验证Hcy与心房颤动的关系，其次从细胞水平观察不同浓度Hcy干预对心房肌细胞MDA（丙二醛，malonaldehyde，MDA）含量、SOD（超氧化物歧化酶，superoxide dismutase，SOD）活力、GSH（谷胱甘肽氧化酶，glutathione，GSH）活力及Cx43（缝隙连接蛋白43，conexin43，Cx43）表达的变化。初步探讨Hcy对心房肌细胞的影响。
　　方法：
　　1、收集2013.12-2015.2在我院住院的特发性心房颤动患者73例，检测患者血浆Hcy水平。同时以30例健康人作为对照。
　　2、SD乳鼠心房肌细胞培养，用α-actinin肌动蛋白进行心房肌细胞鉴定。
　　3、Hcy干预：将心房肌细胞分为五组：空白对照组、Hcy干预组（分别含10、50、100和200μmol/L Hcy的细胞培养液），培养24h、48h、72h。倒置显微镜下观察各组心房肌细胞的形态结构及生长状态。用CCK-8法检测细胞存活率。
　　4、用试剂盒检测心房肌细胞MDA含量、SOD和GSH的活力变化。
　　5、用Western blot法检测心房肌细胞Cx43的表达变化。
　　结果：
　　1.特发性心房颤动组与正常对照组相比，Hcy水平高于对照组（p<0.05）。
　　2.不同浓度的Hcy作用于心房肌细胞后，随着Hcy浓度的增大与作用时间的延长，心房肌细胞的存活率下降，在200μmol/L的Hcy干预72h时，心房肌细胞存活率最低。
　　3.与空白对照组相比，Hcy干预24h组（100μmol/L、200μmol/L），48h组和72h组（50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L）MDA含量升高（p<0.05）。Hcy干预72h组与24h组（50μmol/L、200μmol/L）相应浓度相比MDA含量升高（p<0.05），Hcy干预72h组与48h组（50μmol/L、200μmol/L）相应浓度相比MDA含量升高（p<0.05）。
　　4.与空白对照组相比，Hcy干预24h（100μmol/L、200μmol/L）组，48h组（50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L）和72h（10μmol/L、50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L）组SOD活力降低（p<0.05）。Hcy干预72h组(10μmol/L、50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L)与24h组相应浓度相比 SOD活力降低（p<0.05），Hcy干预72h组(50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L)与48h组相应浓度相比SOD活力降低（p<0.05）。
　　5.与空白对照组相比，Hcy干预24h组（100μmol/L、200μmol/L），48h组（50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L）和72h组（10μmol/L、50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L）GSH活力下降（p<0.05）。Hcy干预72h组(10μmol/L、50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L)与24h组相应浓度相比 GSH活力下降（p<0.05），Hcy干预72h组(50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L)与48h组相应浓度相比GSH活力下降（p<0.05）。
　　6.Western blot蛋白检测发现：不同浓度Hcy干预72h时，心房肌细胞Cx43的表达随浓度升高呈现下降趋势；200μmol/L Hcy分别干预24h，48h，72h时，心房肌细胞Cx43的表达随时间增加也呈现下降趋势。
　　结论：
　　1、特发性心房颤动患者体内Hcy水平高于正常对照组，Hcy可能与心房颤动独立相关。
　　2、在Hcy的干预下，心房肌细胞MDA含量升高、SOD活力降低、GSH活力下降，并表现一定的时间-剂量效应关系，表明Hcy对心房肌细胞产生了明显的氧化应激和细胞损伤。
　　3、Hcy引起心房肌细胞Cx43表达下降；且呈剂量依赖性，可能是Hcy引起心房肌细胞电重构的机制之一。

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英文缩略词

第1章 前言

第2章 材料与方法

2.1 病历样本选择

2.2 细胞株

2.3 仪器及设备

2.4 试剂

2.5 原代心房肌细胞培养

2.6 CCK-8法测定Hcy对心房肌细胞毒性

2.7 总蛋白的测定

2.8 超氧化物歧化酶（SOD）的测定

2.9 谷胱甘肽氧化酶（GSH）的测定

2.10丙二醛（malonaldehyde, MDA）的测定

2.11 Western blot检测

2.12统计学分析方法

第3章 结果

3.1 临床收集病例结果

3.2 细胞实验部分

第4章 讨论

4.1 Hcy的存在形式与代谢

4.2 Hcy与房颤的关系

4.3 Hcy致心房颤动的可能机制

第5章 结论

第6章 不足之处

致谢

参考文献

攻读学位期间的研究成果

综述: 心房颤动的生物标记物研究进展#