产α-L-鼠李糖苷酶菌种的筛选及其制备橙皮素单葡萄糖苷的研究

摘要

α-L-鼠李糖苷酶是一种重要的水解酶，能够有效的水解1,2位、1,3位、1,4位及1,6位连接的糖苷键。橙皮苷是一种具有较广泛生理活性的黄酮类化合物，是由一个黄酮母环和一个1,6位连接的芸香糖苷组成，具有抗炎、抗氧化、抗癌、维持血管正常渗透压和降低血脂等多种生理活性。本论文通过从腐烂的柑橘中筛选得到一株α-L-鼠李糖苷酶的产生菌种，利用该菌种产酶水解橙皮苷得到橙皮素单葡萄糖苷。主要内容及研究结果如下：
　　1.从腐烂的柑橘果皮中筛选得到一株α-L-鼠李糖苷酶的产生菌株，并利用该菌种发酵产酶，将橙皮苷水解得到橙皮素单葡萄糖苷，并初步对该菌种进行了鉴定，确定其为曲霉属黑曲霉组。对发酵培养条件进行了优化，确定最优培养基组分为：马铃薯20％，葡萄糖2.0%，酵母膏1.0%，磷酸氢二钾0.3%，橙皮苷0.75%；最适反应条件为：温度35℃，pH5.5，反应的时间72h，转速为180r/min。
　　2.对α-L-鼠李糖苷酶进行了分离纯化及酶学性质的研究。主要采用硫酸铵沉淀、透析脱盐等方法对酶进行了初步纯化。此外，采用电泳法确定了酶的分子量为60KDa，酶的最适反应温度为55℃，最适反应pH为6.0，热稳定范围为20-70℃，酸碱稳定范围为3.0-7.0，测定其米氏常数Km值为11.66mmol/L。
　　3.采用硅胶柱法、大孔树脂法分别对橙皮素单葡萄糖苷进行了分离纯化。确定硅胶柱法所采用的洗脱液为甲醇：乙酸乙酯：三氯甲烷=1:4:5，经硅胶柱法分离得到的橙皮素单葡萄糖苷的纯度为91.71%；对大孔树脂进行了静态吸附和动态吸附研究，并对洗脱条件进行了研究，确定采用30%的乙醇溶液，流速1 ml/min的条件下，可以有效的分离橙皮素单葡萄糖苷和橙皮苷。

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第一章 绪论

1.1 引言

1.2 橙皮苷简介

1.3 橙皮素单葡萄糖苷简介

1.4α-L-鼠李糖苷酶的研究

1.5α-L-鼠李糖苷酶的分离纯化研究

1.6 橙皮素单葡萄糖苷的分离方法

1.7 论文的研究意义及研究内容

第二章 产酶菌种的筛选、鉴定及发酵条件研究

2.1 引言

2.2主要仪器和试剂材料

2.3实验方法

2.4 实验结果分析讨论

2.6 本章小结

第三章 酶的分离纯化及酶学性质的研究

3.1引言

3.2 主要仪器和试剂材料

3.3实验方法

3.4 实验结果分析讨论

3.5 本章小结

第四章 橙皮素单葡萄糖苷的分离纯化

4.1引言

4.2 主要仪器和试剂材料

4.3实验方法

4.4 实验结果分析讨论

4.5 本章小结

第五章 结论与展望

5 .1 总结

5 .2 展望

致谢

参考文献

攻读学位期间的研究成果